测序/合成

DNA合成服务

基本信息
服务名称:
DNA合成服务
英文名称:
参考报价:
010-82409050
总点击数:
1601
更新日期:
2009-10-22
服务类别:

服务详情

合成简介
目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要是由ABI/PE 公司生产。合成的原理基本相同,主要差别在于合成产率的高低、试剂消耗量和单个循环用时的不同。信利来公司采用的合成仪主要机型为ABI394长链合成仪和美国biosearch公司产的板式高通量192道合成仪。 
        亚磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点。该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的,合成的方向是沿待合成引物的3‘端向5‘端合成,相邻的核苷酸通过3‘→5‘磷酸二酯键连接。 
        第一步,三氯乙酸和预先连接在固相载体(CPG)上的核苷酸反应(其活性基团处于被保护状态),脱去核苷酸5‘-羟基的保护基团DMT,获得游离的5‘-羟基; 
        第二步,合成DNA的原料(亚磷酰胺保护的核苷酸单体)与活化剂四氮唑混合,得到核苷亚磷酸活化中间体,它的3‘端被活化,5‘-羟基仍然被DMT保护,与溶液中游离的5‘-羟基发生缩合反应; 
        第三步,带帽(capping)反应,缩合反应中可能有极少数5‘-羟基没有参加反应(少于2%),用乙酸酐和1-甲基咪唑终止其后继续发生反应,这种短片段可以在纯化时分离掉; 
        第四步,在氧化剂碘的作用下,亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。 
        经过以上四个步骤,一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三氯乙酸脱去它的5‘-羟基上的保护基团DMT,重复以上步骤,直到所有要求合成的碱基被接上去。合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。 通过氨水高温处理,连接在CPG上的引物被切下来,通过OPC, PAGE等手段纯化引物,成品引物用C18浓缩、脱盐,测定OD260定量。

公司简介
北京信利来科技有限公司()是一家集生产、销售和研发于一体的综合型企业。我们主要提供DNA测序、DNA合成、RNAi、全基因合成等技术服务,生产、销售分子生物学试剂、细胞生物学试剂、免疫学试剂和医用原料。信利来技术服务中心拥有一流的实验设备,经验丰富的实验技术人员,我们还是BD, Axygen, Millipore, Apricot Desigens, FluidX,Invitrogen/Gibco,Merck,SIGMA-ALDRICH,GE,Whatman,Biohit,Eppendorf等知名品牌的代理商和经销商 自公司成立之日起,我们就把“让客户满意”做为我们努力追求的目标,与国际接轨的管理体系,与世界同步的企业文化,扬天地正气的团队精神是信利来公司得以持续、稳定、健康发展的根本保障!以一流的技术、一流的设备、一流的管理、一流的员工、一流的产品,奋力打造同行业企业航母!

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