分子与细胞

单细胞 RNA 测序

基本信息
服务名称:
单细胞 RNA 测序
英文名称:
scRNA-seq
参考报价:
伯豪生物 官网:http://www.shbio.com 询价热线 021-58955370
总点击数:
4517
更新日期:
2025-02-21
服务类别:

服务详情

伯豪生物官 www.shbio.com 新官网消息 单细胞 RNA 测序科研服务来了

1、SMART-seq

仪器平台

2012 年,由美国和瑞典的科学家共同开发了称为 Smart-Seq(Switching mechanism at 5’end of the RNA transcript)的技术 [1]。在 2013 年,Nature Methods 杂志上报告了新的方案,被称为 Smart-Seq2[2],随后在 2014 年他们有公布了详细的操作流程 [3]。获取单细胞并裂解细胞后,含有 oligo-dT 的引物与 mRNA 的 poly- A 结合,逆转录酶 MMLV 进行逆转录,逆转录酶到达 mRNA 5’末端时,MMLV 的末端转移酶活性会在一链 cDNA 的 3'末端增加额外的胞嘧啶,这时 TSO 引物 3' 末端的 rGrG+ G 结合到首链末端的胞嘧啶,然后以首链 cDNA 为模版进行延伸合成互补的第二链,全长 cDNA 经过 PCR 扩增后进一步进行测序文库的构建。

技术原理

伯豪生物单细胞 RNA 测序服务 SMART-seq2 技术原理

▲SMART-seq2 技术原理

伯豪生物提供:单细胞转录组测序、生信分析整体科研技术服务,伯豪生物单细胞转录组测序优研服务商,24 小时咨询服务热线:021-58955370

伯豪优势

1、起始量低:1 个细胞起始,适用于难以满足 10X Genomics 等平台起始细胞量要求的样本。

2、覆盖度高: 测序覆盖 cDNA 的全长序列,每个细胞能够获得上万个基因的表达。

3、信息个性化: 除了获得基因表达信息,数据能够用于可变剪接,cSNP 等分析,以及带 poly- A 结构的 lncRNA 研究。

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技术参数

文库结构

单细胞 RNA 测序 SMART-seq2 文库结构

图 SMART-seq2 文库示意图

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建议测序深度及参数

指标

参数

测序深度

6Gb/cell

测序类型

PE150

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样本要求

1、类型:新鲜组织,原代细胞,细胞系等。

2、来源:血液提取、磁珠富集、流式富集、组织解离等。

3、样本量:单个细胞(或微量细胞)。

4、保存运输:细胞放入 SMART-seq 试剂盒指定的裂解液中,-80°C 保存,干冰运输。

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2、10X Genomics

仪器平台

10X Genomics 公司的 Chromium 系统利用 8 通道的微流体“双十字”交叉系统,将含 barcode 的凝胶珠(Gel Beads)、细胞和酶的混合物、油三者混合,形成 GEMs(油包水的微体系)。GEMs 形成后,细胞裂解,凝胶珠自动溶解释放大量 barcode 序列,随后 mRNA 逆转录产生带有 10X barcode 和 UMI 信息的 cDNA,构建标准测序文库,其中 10X barcode 用于区分细胞,UMI 用于区分 mRNA 分子。

单细胞 RNA 测序 10Xgenomics 技术原理

图 10X genomics 技术原理

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伯豪优势 3

1、通量高: 一张芯片具有 8 个独立的通道,可供 8 个样本同时上机,每个通道可捕获 10000 个细胞。

2、捕获率高: 单细胞捕获效率高达 65%,多细胞比例 <0.9%(1,000 个细胞中)。

3、延展性强: 除了获得单细胞 mRNA 的信息,还提供了单细胞 TCR/BCR、单细胞表面蛋白、单细胞 ATAC 等多种解决方案。

 

技术参数

  文库结构

10X Genomics 3’gene expression 文库示意图

图 10X Genomics 3’gene expression 文库示意图

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建议测序深度及参数

指标

参数

测序深度

50,000~100,000 reads/cell

测序类型

PE150

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样本要求

1、类型:新鲜组织,原代细胞,细胞系等。

2、来源:血液提取、磁珠富集、流式富集、组织解离等。

3、样本量及其它质控要求:

样本类型 样本质控要求
细胞悬液 >105 目标细胞个数(底限 10,000 个细胞);
活率 >80%;
浓度 500-1,000 个细胞 /ul;
细胞间无粘连(成团率 <5%);
无大于 40μm 的细胞碎片或其他颗粒物;
不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。
血液 EDTA 抗凝的全血(不可肝素抗凝),>5ml。
组织 0.3cm×0.3cm(不超过 0.5cm×0.5cm)的新鲜组织,4~5 块。

4、保存运输:

(1)细胞悬液:建议现场制备,如要运输,建议使用伯豪生物自主研发的单细胞保护液,4°C 运输,48 小时内送达伯豪生物实验室。

(2)血液:EDTA 抗凝的全血,4°C 运输,2 小时内送达伯豪生物实验室;或提取 PBMC 后冻存,干冰运输。

(3)组织:建议使用伯豪生物自主研发的单细胞组织保护液,4°C 运输,48 小时内送达伯豪生物实验室。

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3、BD Rhapsody

仪器平台

BD Rhapsody 技术利用卡式芯片在磁性的寡核苷酸条形码标记微球上实现单细胞捕获和 mRNA 转录本的分子标签,然后将这些微球合并到单个管中用于 cDNA 扩增和文库构建。可满足 100~10000 个细胞的自动分选、扩增及建库。

单细胞 RNA 测序 BDRhapsody 技术原理

图 BD Rhapsody 技术原理

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此外,该技术使用带有寡核苷酸的高质量抗体(Ab-oligos),这条寡核苷酸带有抗体特异的条形码,细胞在经过 Ab-oligos 标记后,可在单细胞水平同时获得转录组和蛋白表达。

单细胞 mRNA 与蛋白同时测序

图 单细胞 mRNA 与蛋白同时测序

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伯豪优势 2

高 效 每个样本可测  100~10000  个细胞;
2 天内完成细胞悬液制备、单细胞捕获、扩增以及建库。
灵 活 抗体标签技术可实现多样本混合捕获;
可选择全转录组测序或目标基因测序。
可靠 利用成像系统对单细胞捕获过程进行质控;
单细胞捕获效率高达 80%,多细胞比例 <1%(1,000 个细胞中)。
整合 可同时检测单个细胞的 mRNA 水平与蛋白水平。

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技术参数

文库结构

BD Rhapsody 单细胞 RNA 测序基因表达文库示意图

图 BD Rhapsody 基因表达文库示意图

 

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  建议测序深度及参数

指标

参数

测序深度

50,000~100,000 reads/cell

测序类型

PE150

 

样本要求

1、类型:新鲜组织,原代细胞,细胞系等。

2、来源:血液提取、磁珠富集、流式富集、组织解离等。

3、样本量及其它质控要求:

样本类型 样本质控要求
细胞悬液 > 10*  目标细胞个数(底限   10,000  个细胞);
活率 >80%;
浓度 500-1,000 个细胞 /ul;
细胞间无粘连(成团率 <5%);
无大于 40um 的细胞碎片或其他颗粒物;
不存在逆转录抑制剂和非细胞的核酸分子。
血液 EDTA  抗凝的全血(不可肝素抗凝),>5ml。
组织 0.3cm×0.3cm(不超过 0.5cm×0.5cm)的新鲜组织,4~5  块。
 

4、保存运输:

(1)细胞悬液:建议现场制备,如要运输,建议使用伯豪生物自主研发的单细胞保护液,4°C 运输,48 小时内送达伯豪生物实验室。

(2)血液:EDTA 抗凝的全血,4°C 运输,2 小时内送达伯豪生物实验室;或提取 PBMC 后冻存,干冰运输。

(3)组织:建议使用伯豪生物自主研发的单细胞组织保护液,4°C 运输,48 小时内送达伯豪生物实验室。

分析流程

单细胞 RNA 测序数据质控及过滤

图 数据质控及过滤

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单细胞 RNA 测序去除批次效应

图 去除批次效应

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单细胞 RNA 测序细胞亚群注释

图 单细胞 RNA 测序细胞亚群注释

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单细胞 RNA 测序样本间的细胞构成差异

图 单细胞 RNA 测序样本间的细胞构成差异

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单细胞 RNA 测序 Marker 基因分析

图 单细胞 RNA 测序 Marker 基因分析

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单细胞 RNA 测序拟时序分析

图 单细胞 RNA 测序拟时序分析

单细胞 RNA 测序拟时序 GO 注释

图 单细胞 RNA 测序拟时序 GO 注释

单细胞 RNA 测序拟时序分化转录因子调控网络

图 单细胞 RNA 测序拟时序分化转录因子调控网络

单细胞 RNA 测序细胞亚群的功能富集分析

图 单细胞 RNA 测序细胞亚群的功能富集分析

 

单细胞 RNA 测序细胞亚群的功能富集在样本间的差异

图 单细胞 RNA 测序细胞亚群的功能富集在样本间的差异

单细胞 RNA 测序样本间的功能差异分析

图 单细胞 RNA 测序样本间的功能差异分析

单细胞 RNA 测序细胞通讯网络

图 细胞通讯网络

应用领域

1、胚胎发育

2、器官发育

3、干细胞分化

4、神经科学

5、肿瘤微环境

6、用药指导

7、病毒感染

 

 

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伯豪生物客户项目发文

序号 伯豪生物提供服务 杂志 IF 发表年份 研究内容
1 【服务】RNA-seq

【样本】细胞

【原文链接】点击查看
Molecular Cancer 27.7 2024年 疾病机制
2 【服务】RNA-seq

【样本】颅骨组织

【原文链接】点击查看
MATERIALS & DESIGN 7.6 2024年 疾病机制
3 【服务】RNA-seq

【样本】海水

【原文链接】点击查看
Journal of Environmental Chemical Engineering 7.4 2024年 环境
4

【服务】RNA-seq

【样本】细胞

【原文链接】点击查看

National Science Review 16.3 2024年 基础医学

 

公司简介

伯豪生物园区

 

伯豪生物企业文化茁壮生长

 

上海伯豪生物技术有限公司(简称:伯豪生物,英文名:Shanghai Biotechnology Corporation)2008 年 12 月成立,是生物芯片国家工程研究中心的有机组成部分,专注于提供专业的生物医药和疾病诊断创新技术、产品和优质服务。

 

伯豪生物 CRO 服务内容

 

伯豪生物自成立以来获得了国家基因检测技术应用示范中心、国家工信部专精特新“小巨人”企业、院士专家工作站、高新技术企业、上海市研发公共服务平台(负责“上海市高通量疾病标志物服务平台”和“上海市基因芯片专业服务平台”的运营)、上海市服务外包公共平台、上海科技小巨人企业、浦东新区企业研发机构、联合实验室建设等一系列资质,拥有医疗机构执业许可证、医疗器械经营许可证。

 

伯豪生物历年荣誉证书

 

伯豪生物于 2016 年入选国家发展和改革委员会首批基因检测技术应用示范中心,与复旦大学附属肿瘤医院、上海市胸科医院、上海市儿童医院、上海生物信息技术研究中心等单位共同承担运行“高发肿瘤及遗传性疾病基因检测示范中心”。

 

伯豪生物获得 IOS9001 质量服务体系认证

 

伯豪生物建立了规范化的质量控制体系,通过了 ISO9001:2015 质量技术体系的认证,并参照 GLP- L 的标准,通过 156 个 SOP 文件对项目、样品、实验过程、生物信息分析过程、数据信息管理、保密等进行严格质控。

 

伯豪生物协助客户发表文章数据

 

伯豪生物累计技术服务 10 余年,承接项目数超 10000 个,用户单位 3000 家以上,累计处理样品超过 30 万份,协助客户发表论文 2000 余篇,总影响因子(IF)超 10000 分,平均影响因子(IF)大于 5 分。全面推动中国基因组学服务产业发展。可靠的质量已经得到了国内及国际科研领域的认可!伯豪生物秉承着“服务科技创新,护航人类健康!”的使命,为每一位伯豪生物客户提供专注、专业、高效的科研技术服务。

 

伯豪生物经过十多年不断投入和持续打造,伯豪生物已经成长为一家硬件精良,人才合理,技术专业,管理规范,理念先进,符合国际标准的以技术开发和技术服务见长的生物技术公司。

 

伯豪生物营销网络
 

经营范围
       生物芯片、实验室试剂及相关设备的研发、生产、销售,生物医药技术专业领域的技术服务、技术转让、技术咨询,从事货物与技术的进出口。 【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】。
时空组学
基因组
转录组
表观组
蛋白质组学
生信分析
仪器试剂耗材

售后服务
上海伯豪生物技术有限公司(简称“伯豪生物”) 客服热线:021-58955370 企业微信:177-0213-9967 公司地址:上海市浦东新区张江镇李冰路151号 公司官网:https://www.shbio.com 服务内容:科研CRO服务(生命科学分子实验),科研试剂(品牌:Agilent、BioYou、Tobitec等) 售后标准:遵循ISO9001:2015国际质量标准。
联系方式
单位名称:
详细地址:
浦东新区张江高科技园区李冰路151号
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316778748
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