Real-time PCR技术服务 荧光定量技术服务
基本信息
服务名称：
Real-time PCR技术服务 荧光定量技术服务
英文名称：
Real-time PCR QPCR
参考报价：
询价
服务商：
总点击数：
1562
更新日期：
2010-05-08
服务类别：
服务详情
理论支持：
Realtime-PCR（荧光定量PCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。通常可以分为荧光探针和荧光染料两种：
（1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。
（2）SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。
服务内容：
1、目的基因表达的定性和定量分析（相对定量和绝对定量）；
2、基因芯片的结果验证；
具体操作：
一、定性分析：
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、进行Real-time检测（操作同下）；
二、定量分析：
（一）相对定量
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、分别选取阴性对照、阳性对照及部分样品为模板，采用内参和目的基因的引物（一般为b-actin和GAPDH）进行普通PCR，琼脂糖凝胶电泳观察结果，明确扩增产物的特异性；
3、Real-time检测：
（1）如采用SYBR荧光染料，为每一样品分别设立内参组和目的基因组，各为三复孔；如采用荧光探针，可在同一孔内进行内参和目的基因的表达，设立三复孔；
（2）加样后上机检测，并完成融解曲线的检测；
（3）分析结果：溶解曲线分析引物特异性；
根据ct值计算相对定量值；
（二）绝对定量
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、分别选取阴性对照、阳性对照及部分样品为模板，采用内参和目的基因的引物（一般为b-actin和GAPDH）进行普通PCR，琼脂糖凝胶电泳观察结果，明确扩增产物的特异性；
3、Real-time检测：
（1）检测各样品的内参，以调整各样本DNA总量达到一致；或通过紫外分光光度法测定DNA的含量，调整DNA总量达到一致；
（2）将标准品按梯度稀释后，进行目的基因的检测，制备ct值和目的基因拷贝数相互关系的标准曲线；
（3）将样品进行目的基因的检测后，根据标准曲线计算目的基因的含量；
（3）分析结果：溶解曲线分析引物特异性；
根据ct值计算目的基因的定量值；
三、基因芯片结果验证
1、将得到的样品（组织或细胞）进行RNA提取，并反转录成cDNA（必须设立阴性对照和阳性对照，操作同样品）；
2、进行相对或绝对定量分析，明确目的基因表达的改变；
客户须知：
1、本公司采用SYBR的检测试剂购自TaKaRa，如客户使用探针，建议从TaKaRa或Invitrogen公司定购；
2、本公司的Real-time仪能够同时在1个孔中检测四个指标；
公司简介
公司主要经营产品
1抗体：Abcam Abnova Santa cruz PeproTech eBioscience CaymanR&D Cell Signaling Technology(CST) Zymed Laboratories Chemicon Novus Merck Pierce BD BioLegend BioVision Dynal Biotech ASA MABTech KPL Elisa另外，还经营abnova、Ambion、Biocat、Boston Biochem、Covance、Echelon、hycult、 biotechnology 、Invitrogen、invivogen、Jackson、Labvision/NeoMarkers、lifeSpan、MBL、novus、protein等检测试剂盒
2蛋白产品：蛋白抽提、定量、超滤浓缩管、蛋白marker、PVDF膜、硝酸纤维素膜、N尼龙膜、X光胶片、暗盒、增感屏、定显液（粉）、底物显色发光试剂盒、二抗
3常用生化试剂：Sigma、Merck、Amresco、Roche、Oxoid 、GE原装分装，胰蛋白胨、酵母粉、琼脂糖、苷氨酸、谷胱甘肽、氨基酸、生物缓冲液、分离剂试、培养基、蛋白质 酶和辅酶、核酸及其衍生物、碳水化合物、抗生素、维生素染色剂
4耗材：Axygen、Corning、Millipore、NUNC、NEST，细胞培养板（皿）瓶、PCR 薄壁管、8联排平鼓盖、无菌枪头、离心管、细胞程序冻存盒、电极杯、酶标板、CO2培养箱、倒置显微镜、超净台等科研仪器
5血清：gibco、hyclone、PAA、TBD进口原装胎牛血清、新生牛血清、马血清、DMEM、F12、a-MEM、MEM原装进口液体培养基、粉剂培养基、YNB培养基
售后服务
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