免疫与抗体

免疫沉淀

基本信息
服务名称:
免疫沉淀
英文名称:
Immunoprecipitation
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总点击数:
3066
更新日期:
2013-08-01
服务类别:

服务详情

 据此现象设计的沉淀实验主要包括絮状沉淀试验,环状沉淀试验和凝胶内的沉淀试验。凝胶内的沉淀试验依所用的实验方法又可分为免疫扩散实验和免疫电泳技术2类。

    免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其基本原理是:细胞裂解液中加入抗体,与抗原形成特异免疫复合物,经过洗脱,收集免疫复合物,然后进行SDS-PAGE及Western blotting分析。 

佰而林免疫沉淀操作流程(以Protein A Agarose方法为例):
1.
蛋白样品的准备
  
1 对于10厘米细胞培养皿中的贴壁细胞,吸除细胞培养液,PBS洗涤一次,然后加入500微升至2毫升细胞裂解液裂解细胞。
    (2) 
对于组织样品参考贴壁细胞使用裂解液的比例进行裂解。
    (3)
对于悬浮细胞,离心收集细胞后,PBS洗涤一次,然后参考贴壁细胞的裂解方法进行裂解。
2
.去除非特异性结合
    (1) 
200微升至1毫升蛋白样品,蛋白量约为200微克至1毫克,加入约1微克和免疫沉淀时使用的IgG种属相同的普通IgG20微升充分重悬的Protein A Agarose4
缓慢摇动30分钟至2小时。
    (2)2500rpm(
1000g)离心5分钟,取上清用于后续的免疫沉淀。
3
.免疫沉淀
    (1) 
加入0.2-2微克用于免疫沉淀的一抗,4
缓慢摇动过夜。
    (2) 
再加入20微升充分重悬的Protein A Agarose4
缓慢摇动1-3个小时。
    (3)2500rpm(
1000g)离心5分钟,或瞬时高速离心,小心吸除上清,注意宁可留下少量上清也不能吸掉Protein A Agarose
    (4) 
用准备蛋白样品时的裂解液或PBS洗涤沉淀5次,裂解液或PBS的用量每次为0.5-1毫升。洗涤时离心条件和吸除上清的要求同上面的步骤。
    (5)
完成最后一次洗涤后,去除上清,加入20-40微升1XSDS-PAGE电泳上样缓冲液Vortex重悬沉淀,瞬时高速离心把样品离心至管底。
    (6)100
或沸水浴处理3-5分钟,取部分或全部样品用于SDS-PAGE电泳,暂时不用的样品可以-20保存。

免疫共沉淀:参考免疫沉淀的方法进行,但免疫共沉淀(co-IP)通常必须使用未经冻存的新鲜蛋白样品。普通的免疫沉淀虽然可以使用冻存的蛋白样品,但也宜用新鲜的蛋白样品为佳。

公司简介

佰而林生物科技有限公司,是一家由归国留学专家创办的专注于生命科学领域的高科技企业。公司提供覆盖分子生物学、细胞生物学、免疫学等领域的实验室产品、生物技术服务以及专业生物统计分析等咨询服务,致力于为客户在生命领域探索创造有利条件。经过三年的高速发展,已经在全国重点城市都成立了办事处,与当地科研院校保持着广泛的合作。

佰而林提供覆盖临床医学、分子生物学、细胞生物学、免疫学、病理学等生命科学领域的生物技术服务,包括荧光定量PCR、免疫印迹、ELISA、流式细胞术、免疫组化、动物造模等。公司技术人员均具备本科以上专业背景,为客户提供强大的技术保障。

佰而林广州实验中心拥有强大的技术团队,公司员工研究生以上学历占比30%,本科以上学历占比100%。公司配备先进科研仪器设备如:AKTA蛋白纯化系统、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、液-质联用(LC-MS)系统、luminex200、制备兼分析型高效液相色谱仪、酶联斑点图像自动分析仪、实时荧光定量PCR仪等。

佰而林的服务宗旨是提升客户的研发技术质量,降低客户的研发总体成本,缩短客户的研发整体周期。让我们专业的技术团队,为您的成功,助一臂之力。
 


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