免疫与抗体

蛋白质印迹

基本信息
服务名称:
蛋白质印迹
英文名称:
Western Blotting
参考报价:
询价
总点击数:
3527
更新日期:
2013-08-01
服务类别:

服务详情

佰而林服务流程:

 

1、蛋白质抽提
(1)
组织样品,取适合量的新鲜组织样品或正确保存的组织样品(非常重要),加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂或其它蛋白提取试剂,匀浆后抽提总蛋白或核、膜蛋白。
(2)细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,用PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml-1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂或其它蛋白提取试剂抽提总蛋白或核、膜蛋白。

 

2、蛋白质定量:用Bradford检测或BCA蛋白检测试剂检测蛋白的浓度。
3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE),用微量加样枪准确加样到相应的加样孔中,安装电泳分离蛋白。
4、蛋白转移到硝酸纤维膜或PVDF膜上。按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层,30mA恒流条件下,4℃转移过夜。
 
5、膜的封闭和抗体孵育
(1)膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非物异结合。
(2)封闭过的膜加入一级抗体室温孵育膜1.5h,抗体抗原结合。
(3)加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准,室温孵育膜1小时,加入HRP标记的GAPDH/b-actin抗体可以同时检测GAPDH/b-actin含量。

6、结果检测:化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X光胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件,并用Image分析软件将图片上每个特异条带灰度值数字化。
7、数据分析:目的蛋白的灰度值除以内参GAPDH/b-actin的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品的蛋白相对含量。
8、提供实验报告:包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关图片和数据。
 

客户需提供:样本、一抗、阴性、阳性对照和相关文献资料(一抗可由我们代购)。

样品要求:组织100mg以上、细胞106以上,新鲜或冷冻保存。

如何选择和选购抗体——PASS标准

 http://blog.sina.com.cn/s/blog_721358b20100orr8.html

公司简介

佰而林生物科技有限公司,是一家由归国留学专家创办的专注于生命科学领域的高科技企业。公司提供覆盖分子生物学、细胞生物学、免疫学等领域的实验室产品、生物技术服务以及专业生物统计分析等咨询服务,致力于为客户在生命领域探索创造有利条件。经过三年的高速发展,已经在全国重点城市都成立了办事处,与当地科研院校保持着广泛的合作。

佰而林提供覆盖临床医学、分子生物学、细胞生物学、免疫学、病理学等生命科学领域的生物技术服务,包括荧光定量PCR、免疫印迹、ELISA、流式细胞术、免疫组化、动物造模等。公司技术人员均具备本科以上专业背景,为客户提供强大的技术保障。

佰而林广州实验中心拥有强大的技术团队,公司员工研究生以上学历占比30%,本科以上学历占比100%。公司配备先进科研仪器设备如:AKTA蛋白纯化系统、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、液-质联用(LC-MS)系统、luminex200、制备兼分析型高效液相色谱仪、酶联斑点图像自动分析仪、实时荧光定量PCR仪等。

佰而林的服务宗旨是提升客户的研发技术质量,降低客户的研发总体成本,缩短客户的研发整体周期。让我们专业的技术团队,为您的成功,助一臂之力。
 


售后服务
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