暗场显微镜主要是采用一种特殊的聚光器,在聚光器的下方中央被圆形黑盘挡住,光仅由周缘进入,使光聚集于载玻片上,并斜照物体,物体经斜射照明后,发出反射光进入物镜,这样,造成显微镜视野黑暗,而其中的物体明亮。暗场显微镜是指采用暗视野进行观察的显微镜,暗场显微镜的原理就好比我们生活中的阳光通过暗室时,可清楚地看到其中细微灰尘的现象是一样的,即给样品照明的光不直接穿过物镜,而是由样品上反射或折射的光进入物镜,因此观察生活细菌及细菌运动时常采用该种显微镜。
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我们以酿酒酵母为实验材料,对其进行暗视野观察,以此来说明暗视野显微镜是如何进行实验操作的。
酿酒酵母是单细胞,卵圆形或球形,具细胞壁、
细胞质膜、细胞核(极微小,常不易见到)、液泡、线粒体及各种贮减物质,如油滴、肝糖等 。
酿酒酵母生长在麦芽汁琼脂培养基上的酿酒酵母菌落为乳白色,有光泽、平坦、边缘整齐;细胞宽度2.5-10 μm,长度 4.5 -21 μm,长与宽之比为 1 -2,多为圆形、卵圆形或卵形。酿酒酵母作为单细胞真核生物的代表,发酵工艺成熟,生物安全性高,主要用于燃料乙醇、白酒、葡萄酒、啤酒等的酿造生产中。 酿酒酵母活菌、非活性成分及细胞组成成分也已广泛应用于畜牧养殖业和饲料工业。
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1. 在使用暗视野显微镜进行观察时,有一些必要的注意事项我们要了解清楚:
进行暗视野观察时,聚光镜与载玻片之间滴加的香柏油要充满,否则照明光线于聚光镜上面进行全面反射,达不到被检物体,从而不能得到暗视野照明。
2. 在进行暗视野观察标本前,一定要进行聚光镜的中心调节和调焦,使焦点与被检物体一致。
3. 由于暗视野聚光镜的数值孔径都较大(NA=1.2~1.4),焦点较浅,因此,过厚被检物体无法调在聚光镜焦点处,一般载玻片厚度为1.0 mm 左右,盖玻片厚度宜在0.16 mm 以下,同时载玻片、盖玻片应很清洁,无油脂及划痕,否则都会严重地扰乱最
终的像。
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暗场显微镜观察酿酒酵母实验步骤如下:
1. 选1.0~1.2 mm 厚度的干净载玻片一块,滴上酿酒酵母悬液,加盖玻片(注意切勿有气泡存在)。
2. 将聚光镜光圈调至1.4。
3. 光源的光圈孔调至最大。
4. 在聚光器上放一大滴香柏油,将标本置载物台上,旋上聚光器使油与载玻片接触(不能有气泡发生)。
5. 用低倍物镜及7×目镜进行配光对准物体。调节聚光器的高度,首先在载玻片上出现一个中间有一黑点的光圈,最后为一光亮的光点,光点愈小愈好,由此点将聚光器上下移动时均使光点增大。
6. 换上所需目镜和高倍镜,缓慢上升物镜进行调焦,至视野中心出现发光的样品。
7. 在盖玻片上滴一滴香柏油,并将油镜转至应在位置调节配光,进行观察。
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显微镜技术的不断更新发展,使得我们对生活、自然研究有了更深入的了解,研究的不断深入也使得我们更加了解自然规律,这是时代发展的必要条件。
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