芯片与生物信息学

环状RNA芯片技术服务

基本信息
服务名称:
环状RNA芯片技术服务
英文名称:
circRNA microarray sevice
参考报价:
免费咨询800-820-5058;400-886-5058
总点击数:
2319
更新日期:
2018-11-26
服务类别:

服务详情

    环状RNA(circRNA)是一类由特殊剪接机制形成的、具有闭合环状结构、大量存在于真核转录组中的非编码RNA;也是目前生命科学和医学领域的研究热点分子。circRNA分子的组织特异性、疾病特异性、时序特异性及高稳定性等特征,使得circRNA作为临床疾病的biomarker具有明显的优势。近来研究显示,环状RNA在不同物种中起到miRNA海绵的作用,称之为竞争性内源RNA(ceRNA),即能竞争性结合miRNA。而与疾病关联性miRNA的相互作用说明环状RNA对疾病的调控起着非常重要的作用。此外,一些内含子类型的环状RNA(ciRNA)会促进宿主基因的转录。
    为了能够更好地研究circRNA,美国Arraystar公司在全球首款circRNA芯片基础上迅即升级版本为V2.0。其circRNA来源融合了环状RNA研究的最新顶尖文献,所有cicrRNA都经过了严谨的实验验证,以便于对不同生理及病理条件下的circRNA进行系统的研究。同时我们对所有差异表达的circRNA用高匹配值的miRNA靶标位点进行了标注,这将有利于对circRNA作为天然miRNA海绵功能的进行研究。
 

康成生物是Arraystar公司中国地区唯一代理商,为您提供一站式circRNA芯片技术服务,您只需要提供保存完好的组织或细胞标本,康成的技术服务人员就可为您完成全部实验操作,并提供完整的实验报告。


Arraystar环状RNA芯片产品列表

服务

芯片

规格

描述

Human Circular RNA  Array Service

NEW  Human Circular RNA Array V2.0

8 × 15K

13,617 human circular RNAs

Mouse Circular RNA  Array Service

NEW  Mouse Circular RNA Array V2.0

8 × 15K

14,236 Mouse circular RNAs

Rat Circular RNA  Array Service

NEW  Rat Circular RNA Array V2.0

8 × 15K

14,145 Rat circular RNAs

 

Arraystar环状RNA芯片特点

· 全面、系统的circRNA收集:circRNA研究领域顶尖期刊和权威公共数据库,运用强大的信息筛选系统,挑选出最可靠的circRNA。
 
· 高效、精准的circRNA检测:剪接位点特异性探针与Rnase R预处理双重保障,即便相应线性RNA存在也能特异性检测circRNA。
 
· 严谨、可靠的Spike-in对照:在RNA样品中加入一组由ERCC (External RNA Controls Consortium)开发的外源性RNA,可对RNA扩增,标记和芯片杂交过程中产生的实验偏差进行校正,增加样本间结果比较的可靠性。
 
· 详尽、丰富的circRNA注释:Arraystar miRNA靶基因预测软件对circRNA上的保守miRNA的结合位点进行了预测,并对其中匹配分值较高的位点进行了注释(下图)。此外,我们还提供了与circRNA对应的线性mRNA信息。根据信息,客户可以很方便地从不同角度研究circRNA的作用机制和生物功能。

               

   
*图释:circRNA芯片实验大体流程(上图)及详细的circRNA注释(下图):1)与circRNA对应的线性mRNA信息;2)circRNA上匹配度比较好的保守miRNA的结合位点。
 
circRNA高通量筛选的利器:RNA-seq or microarray?
    circRNA在细胞内含量极低,约占线性RNA的5-10%,通过测序获得的circular junction reads 数目更低。RNA测序仅仅能有效检测低于5% 的circRNAs(图6),即便将测序量提高到300M reads,对于检测准确度的影响也是微乎其微。
    测序不是circRNA高通量筛选的最优检测手段,circRNA-seq需要双端模式和极高的测序量。此外,后续的数据分析(如mapping所需数据库、circRNA转录本组装、特殊生物信息学算法、计算机筛选程序等)也存在一系列难题。由于上述因素所限,通过circRNA-seq发现新的circRNA的可能性几乎为零。
    circRNA芯片采用特异性剪接位点探针与外切酶预处理双重保障,能够准确检测样本中circRNA的表达。芯片杂交不受RNA丰度的影响,即便在一个细胞中只含一个circRNA拷贝也能够做到特异性检测。此外,芯片避免了circRNA-seq复杂的建库过程,其简单成熟的技术是circRNA高通量筛选的首选平台。

               
*图释:定量可靠的转录本比例与测序深度关系图。RNA测序一般产生低于30M mRNA reads(蓝圈),低于0.5M circular junction reads(红圈),真正得到有效检测的circular junctions低于5%。(Adopted from Labaj et al, (2011) Bioinformatics [PMID 21685096].)

康成生物环状RNA芯片技术服务主要实验流程
    1. 样品RNA抽提

   • 实验对象为组织样品,取适量(50-100mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml的RNA抽提试剂TRIzol(Invitrogen),匀浆后抽提RNA。
   • 实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,完全吸去培养液后加1ml的RNA抽提试剂TRIzol,裂解后抽提RNA。
    2.  RNA质量检测
  • 使用Nanodrop测定RNA 在分光光度计260nm、280nm和230nm的吸收值,以计算浓度并评估纯度。
  • 用甲醛电泳试剂进行变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度及完整性。
  • 提供RNA QC报告。
    3. RNase R处理
    4. cDNA/aRNA样品合成和标记
    5. 标记效率质量检测

  • 使用Nanodrop检测荧光标记效率,标记效率合格以保证后续芯片实验结果的可靠性。
    6. 芯片杂交
  • 在标准条件下将标记好的探针和高密度基因组芯片进行杂交。
    7. 图像采集和数据分析
  • 使用GenePix 4000B芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度,并将实验结果转换成数字型数据保存,使用配套软件对原始数据进行分析运算。
    8. 提供实验报告:
  • Scanning Image: Cy3荧光扫描图像;
  • Scatter Plot: 散点图,X轴为Control信号值,Y轴为Experiment信号值,表示信号数据总体分布趋势;
  • Raw Data: 探针的扫描荧光信号强度原始数据;
  • Normalized Data: 经过统计学方法标准化后数值;
  • P–value: T-test统计分析显著差异表达的基因,p-value越小,该circRNA在两组样本间差异表达越显著;
  • Significant Up & Down Regulated CircRNA List: 显著差异表达的circRNA列表包含Fold Change, p-value以及circRNA的详细注释信息(相应的线性mRNA和miRNA结合位点)。


康成客户实例——Arraystar环状RNA芯片
circRNA在免疫衰老中的相关研究 (Comprehensive circular RNA profiling reveals that circular RNA100783 is involved in chronic CD28-associated CD8(+)T cell ageing. Immunity & Ageing, 2015)
    生物机体免疫系统随着年龄的增长而不断恶化,这个过程被称为免疫衰老(immunosenescence);免疫衰老与系统炎症反应、慢性炎症疾病及癌症发生等密切相关,但目前对引发免疫衰老的机制了解的甚少。该研究通过Arraystar circRNA芯片筛选发现:在健康成人与免疫力低下的老年人的外周血淋巴细胞中,circRNA的表达谱具有明显的差异。在差异表达的circRNA中,研究者通过qPCR验证发现hsa_circRNA_100783可以明显区分两种不同类型的样本,可以作为免疫衰老的biomarker。研究者接着对circRNA可能结合的miRNA进行了靶基因预测,推测circRNA很可能通过调控磷酸蛋白信号转导途径来影响免疫细胞衰老的过程。
 

 

上海康成生物工程有限公司 

地址:上海市漕河泾高新技术开发区虹漕路421号63号楼2楼 
免费热线:400-886-5058 ; 800-820-5058(座机)
电话:021-64451989         传真:021-64452021
网址:www.kangchen.com.cn

公司简介



上海康成生物工程有限公司自2002年起专注于生物科研技术服务,是国内最早一批专业提供生命科学前沿研究技术服务的高科技企业。为进一步拓展在医学科研服务领域业务的深度和广度,向多谱领域发展,重塑品牌 Aksomics(数谱生物)Aksomics全面整合公司在非编码RNA(lncRNA、circRNA、small RNA等)、表观遗传学、蛋白组学等检测方向的核心技术,依靠自身优秀的研发、技术、营销和服务团队,凭借国际领先的技术平台和高标准的质控体系,形成了涵盖表观基因组学、转录组学、蛋白质组学及代谢组学等各个研究领域的一站式技术平台。

【表观基因组学】 DNA甲基化芯片、DNA羟甲基化芯片、染色质免疫共沉淀芯片、DNA甲基化测序、DNA羟甲基化测序、染色质免疫共沉淀测序、MeDIP-PCR、hMeDIP-PCR、ChIP-PCR等

【转录组学】LncRNA芯片、LncPath™芯片、环状RNA芯片、T-UCR芯片、microRNA芯片、piRNA芯片、全基因组表达谱芯片、RNA测序、RNA m6A甲基化测序、small RNAs测序系列(microRNA测序、tRF&tiRNA测序、snoRNA测序、piRNA测序等)、LC-MS tRNA修饰检测、 nrStar™ ncRNA PCR芯片(tRF&tiRNA,tRNA,snoRNA,Functional LncRNA)、miRStar™癌症特异性microRNA PCR芯片、NuRNATM mRNA PCR芯片、功能分类PCR芯片、LncRNA实时定量PCR、环状RNA实时定量PCR、tRF&tiRNA实时定量PCR、microRNA实时定量PCR、mRNA实时定量PCR

【蛋白组学平台】TMT标记定量蛋白组学服务、Lable-free定量蛋白组学服务、磷酸化修饰蛋白组学服务、泛素化修饰蛋白组学服务、N-糖基化修饰蛋白组学服务、乙酰化修饰蛋白组学服务、蛋白-蛋白相互作用组学

【代谢组学】靶向代谢组学、非靶向代谢组学

【外泌体组学】外泌体转录组学、外泌体蛋白质组学、外泌体代谢组学
康成生物为Agilent、Arraystar、Exiqon、Illumina、Qiagen、Thermo Fisher等国际知名品牌提供技术服务。康成客户采用各类技术服务发表的SCI论文已超560篇。康成生物将持续聚焦生命科学发展的挑战,提供有竞争力的产品和服务,持续为客户创造最大价值。

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