全基因组重测序
全基因组重测序可以辅助研究者发现单核苷酸多态性位点(SNPs)、拷贝数变异(Copy Number Variation, CNV)、插入(Insertion)、缺失(Deletion)等变异类型,以最廉价的方式将单个参考基因组信息扩增为生物群体的遗传特征。可以寻找到大量基因差异,实现遗传进化分析及重要性状候选基因的预测。涉及临床医药研究、群体遗传学研究、关联分析、进化分析等众多应用领域。
随着测序成本的大幅度降低以及测序效率的数量级提升,全基因组重测序已经成为研究人类疾病及动植物分子育种最为快速有效的方法之一。利用Hiseq 2000 平台,将不同插入片段文库和双末端测序相结合,可以高效地挖掘基因序列差异和结构变异等信息,为客户进行疾病研究、分子育种等提供准确依据。
重测序的两个条件:(1)该物种基因组序列已知;(2)所测序群体之间遗传性差异不大( >99% 相似度 )。在已经完成的全基因组测序及其基因功能注释的基础上,采用全基因组鸟枪法(WGS)对DNA 插入片段进行双末端测序。
全基因组重测序实验流程:样品检测--样品制备--cluster 制备--上机--基本数据处理--生物信息分析
全基因组重测序生物信息学分析内容:
1) 数据产出统计
2) 基因组单碱基深度分布及覆盖度分析
3) 一致序列组装
4) SNP检测及其在基因组的分布
5) 结构变异检测及其在基因组的分布
全基因组重测序样品要求:
客户提供待测基因组样本。
1. 样品总量:每次样品制备需要大于5ug 的样品。为保证实验质量及延续性,请一次性提供至少20ug的样品。如需多次制备样品,按照制备次数计算样品总量。
2. 样品纯度:OD值260/280应在1.8~2.0 之间;无蛋白质、RNA或肉眼可见杂质污染。
3. 样品浓度:不低于50 ng/μL。
4. 样品质量:基因组完整、无降解,电泳结果基因组DNA主带应在λ‐Hind III digest最大条带23 Kb以上且主带清晰,无弥散。
5. 样品保存:限选择干粉、酒精、TE buffer或超纯水一种,请在样品信息单中注明。
6. 样品运输:样品请置于1.5 ml管中,做好标记,使用封口膜封好,并同《样品信息单》一起放到塑料样品袋中封口。基因组DNA如果用乙醇沉淀,可以常温运输;否则建议使用干冰或冰袋运输,并选择较快的运输方式。
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北京康普森生物技术有限公司自2011年成立以来,深耕育种行业,始终将前沿生物技术的产业转化与中国现代种业创新作为企业之责任与担当。利用领先的基因组技术结合信息技术改良开发多物种的新性状,助力育种研发与生产过程的自动化、集成化、数字化和智能化。
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