一、服务介绍

  大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

二、实验原理

 JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料，可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在，分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1 浓度低或膜电位水平低时，主要以单体形式存在，激发波长为527nm，呈绿色荧光；当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时，形成聚合物，发出红色的荧光，激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，红光强度减弱，以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光，根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。

三、实验流程

1. 细胞培养；

2. 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性依照组合阳性对照组，收集细胞；

3. 用PBS洗涤细胞三次，收集不多于1×106的细胞；

4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer，混匀并预热至37℃；

5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，涡旋混匀配成JC-1工作液；

6. 取500 μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮，37℃，5% CO2的培养箱中孵育15~20min。

7. 室温离心（2000rpm,5min）收集细胞，用1×Incubation Buffer洗两次；

8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞；

9. 流式细胞仪检测，分析。

四、客户提供

细胞株(冻存株或培养好的细胞)，相关药品或MMP检测试剂盒（可代购）

五、公司提供

实验步骤、结果图、数据结果和分析报告

实验周期：1-2周，具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。

基尔顿生物科技（上海）有限公司成立于2005年，于2012年更名为基尔顿生物科技（上海）有限公司，公司位于上海长江软件园，实验室面积600多平方米。公司目前具备全方位的生物学、医学技术服务平台，能够为广大客户提供医学科研样本检测、合作研究、开发及生产服务。

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时光荏苒，通过全体员工的共同努力，公司完全具备从上游的高通量筛选到下游特定基因功能解析的完善整合技术平台，能够真正为客户提供专业、完善的技术解决方案和服务。

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