实验目的:检测组织或细胞中特定目的蛋白的表达水平。
实验原理:将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离,再转移到杂交膜上,然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。其中的步骤包括蛋白样本提取制备,蛋白定量,电泳,转膜与显色。
实验内容与方法:
1、 蛋白提取:根据需要测定的目的蛋白主要来源(胞浆、胞核或者全蛋白),区分组织提取或者细胞提取,选取相应的试剂盒。
2、 蛋白定量:bradford法、BCA法或lowery法测定出所提取的蛋白含量。
3、 蛋白变性:5×电泳上样缓冲液,煮沸5~10分钟。
4、 凝胶电泳:垂直电泳分离出目的蛋白条带。
5、 转膜:将SDS丙烯酰胺中的蛋白通过水平电泳的方式转移到PVDF或者NC膜上。
6、 免疫反应:目的蛋白分别与相应的一抗、二抗结合。
7、 显色反应:通过化学发光法将蛋白条带显影至胶片上。
(1)样本材料:
新鲜或冷冻细胞不少于106个,新鲜或冷冻组织样本不少于50 mg。
已提取的蛋白样品蛋白含量不低于0.1ug/ul。
(2)试剂:蛋白提取与定量可根据客户要求选用特定试剂盒,如客户不提供
试剂盒且无特别要求,则选用凯基公司相应试剂盒产品。一抗二抗反应所用抗体客户自备,凯基也可以提供抗体代订服务。
实验周期:(2-8周,视样本数量而定)
服务报告:提交实验报告书(包括实验材料、试剂、仪器、实验过程方法、结果及分析)、原始数据、图片,文本或电子版。
收费标准:
全蛋白提取 (全蛋白提取及蛋白定量结果,80元/样)
核蛋白提取 (核蛋白提取及蛋白定量结果,100元/样)
膜蛋白提取 (膜蛋白提取及蛋白定量结果,200元/样)
预实验 (自行提供一抗,800元/膜)
正式实验 (自行提供一抗,1000元/膜,每张膜最多8个样)