代做ChIP实验
第一步、细胞的甲醛固定
交联所用的甲醛终浓度约为1%，而交联时间需要预实验来确定。交联时间如果过长，细胞染色质难以用超声波破碎，影响ChIP结果，而且实验材料也容易在离心过程中丢失。交联时间如果过短，则交联不完全，产生假阴性。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。通常的交联条件为室温10 min。
第二步、超声波断裂染色质
甲醛交联后的染色质对限制酶和DNase I高度抵抗，因此通常使用超声使得染色质断裂。超声波是使用机械力断裂染色质，容易引起升温或产生泡沫，这都会引起蛋白质变性，进而影响ChIP的效率。所以在超声波断裂染色质时，要在冰上进行，且要设计时断时续的超声程序，保证低温。总超声时间也不要太长，以免蛋白降解。打断后的染色质片段的长度主要集中在200-1000bp左右(可以用琼脂糖凝胶电泳来鉴定)。
第三步、用特异性抗体与目的蛋白结合，免疫沉淀蛋白和DNA复合物。
抗体的量要进行优化，防止非特异的结合。用Protein-A/G Sepharose回收免疫沉淀复合体。经过洗涤除去非特异结合的染色质。
第四步、65℃解交联蛋白质和DNA复合物，消化蛋白质，纯化富集的DNA。
在免疫沉淀复合体中加人不含DNase的RNase和蛋白酶K，65℃保温6h以上，使交联逆转。交联逆转后用QIAquick DNA cleanup system纯化回收DNA。纯化的DNA极少，可用NanoDrop? ND-1000仪定量。
  |
交联的条件：交联所用的甲醛终浓度约为1%，而交联时间需要预实验来确定。通常的交联条件为室温10 min。甲醛的交联反应可被加入的甘氨酸终止。交联时间如果过长，细胞染色质难以用超声波破碎，影响ChIP结果，而且实验材料也容易在离心过程中丢失。交联时间如果过短，则交联不完全，产生假阴性。
超声片段的大小：打断后的染色质片段的长度应主要集中在200-1000bp左右。交联时间如果过长，细胞染色质难以用超声波破碎，影响ChIP结果，而且实验材料也容易在离心过程中丢失。交联时间如果过短，则交联不完全，产生假阴性。
阳性与阴性对照：在做ChIP实验时，一定要做好实验对照，因为没有对照，很难对实验结果的可靠性进行评估。阳性抗体和阴性抗体对照是最基本的实验对照，阳性抗体通常选择与已知序列相结合的比较保守的蛋白的抗体，常用的包括组蛋白抗体或RNA Polymerase II抗体等；阴性抗体通常选择目的蛋白抗体宿主的IgG。目的蛋白抗体的结果与阳性抗体和阴性抗体的结果相比较，才能得出正确结论。另外，还应考虑目的蛋白抗体与DNA的非特异性结合的可能，所以通常还会选择数对阴性引物，即目的蛋白肯定不会结合的DNA序列，作为该抗体的阴性对照。
上海维景生物科技有限公司是一家专注生命科学领域的企业，借助中科院细胞与免疫学实验平台，拥有强大的资金背景支持和专业的团队等资源。公司面向全国市场，迅速发展，广纳英才，现已建成专业生命科学产品销售团队，其中大部份是在生命科学市场上工作多年，有丰富的销售经验，也有良好的客户资源，销售渠道全面覆盖华东大部分工业以及科研客户，团队中免疫学及相关专业硕士以上学历人士达50%，有较强的技术支持能力，在针对专业技术服务中能够提供完善周到的专业化服务，对客户在使用产品过程中提出的问题能满意答复，并可及时传递最新的产品技术资料信息。
上海维景生物是一家面向全国以专业从事免疫学实验服务外包和免疫学试剂代理销售为主的高新技术企业。公司的服务对象主要为医药科研人员、大型制药公司等。
公司专注开展以下五种免疫学实验服务：免疫印迹（Western Blotting）、免疫组织化学（IHC）、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色质免疫共沉淀(ChIP) 。绝对保证实验质量，客户满意后才收取尾款。
同时公司还是美国Engibody品牌的全国独家总代理，Engibdoy公司产品专注于表观遗传学、标签抗体、内参抗体及标签抗体偶联beads等领域。其开发的标签抗体偶联agarose beads（affinity gel）在科研以及临床研究中享有很高的声誉，更借助Engibody在标签抗体、内参抗体领域的优势，成为免疫印迹WB和免疫沉淀IP实验试剂的专业供应商。因卓越的产品质量及良好的客户口碑，Engibody敢于执行倒赔政策，抗体承诺客户不满意即可申请无条件全额退款，如若产品质量证实有瑕疵，则除了无条件全额退款以外，还会倒赔客户一定金额。
维景生物是一家专注标签抗体偶联beads（affinity gel），标签抗体，HRP直标标签抗体，内参抗体等抗体销售,及WB,IP,Co-IP,ChIP实验外包服务的高科技生物公司
手机：13817407320(微信同号)，咨询 QQ :908869532。
| 单位名称： |
|
详细地址：
上海市中山北路3856弄2号中环大厦1114室
|
|
qq：
908869532
|
| 官网： |
|
联系电话：
021-52682952
|
| Email： |
