免疫与抗体

ChIP实验服务外包

基本信息
服务名称:
ChIP实验服务外包
英文名称:
ChIP(Chromatin immunoprecipitation)
参考报价:
面议
总点击数:
804
更新日期:
2016-06-24
服务类别:

服务详情

ChIP的一般流程:

 
甲醛处理细胞---收集细胞,超声破碎---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA复合物相互结合---加入ProteinA,结合抗体-靶蛋白-DNA复合物,并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合---洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA复合物---解交联,纯化富集的DNA-片断---PCR分析。
 
在PCR分析这一块,比较传统的做法是半定量-PCR。但是现在随着荧光定量PCR的普及,大家也越来越倾向于Q-PCR了。此外还有一些由ChIP衍生出来的方法。例如RIP(其实就是用ChIP的方法研究细胞内蛋白与RNA的相互结合,具体方法和ChIP差不多,只是实验过程中要注意防止RNase,最后分析的时候需要先将RNA逆转录成为cDNA);还有ChIP-chip(其实就是ChIP富集得到的DNA-片段,拿去做芯片分析,做法在ChIP的基础上有所改变,不同的公司有不同的做法,要根据公司的要求来准备样品)。
 
具体操作流程:
 
第一天:
 
(一)、细胞的甲醛交联与超声破碎。
 
1、取出1平皿细胞(10cm平皿),加入243 ul 37%甲醛,使得甲醛的终浓度为1%(培养基共有9ml)。
 
2、37摄氏度孵育10min。
 
3、终止交联:加甘氨酸至终浓度为0.125M。450 ul 2.5M甘氨酸于平皿中。混匀后,在室温下放置5min即可。
 
4、吸尽培养基,用冰冷的PBS清洗细胞2次。
 
5、细胞刮刀收集细胞于15ml离心管中(PBS依次为5ml,3ml和3ml)。预冷后2000rpm 5min收集细胞。
 
6、倒去上清。按照细胞量,加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200ul含2×106个细胞。这样每100ul溶液含1×106个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×106个细胞。本次细胞长得约为80%。即为4×106个细胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。将2管混在一起,共800ul。
 
7、超声破碎:VCX750,25%功率,4.5S冲击,9S间隙。共14次。
 
(二)、除杂及抗体哺育。
 
8、超声破碎结束后,10,000g 4oC离心10min。去除不溶物质。
 
留取300ul做实验,其余保存于-80oC。
 
300ul中,100ul加抗体做为实验组;100ul不加抗体做为对照组;100ul加入4ul5MNaCl(NaCl终浓度为0.2M),65oC处理3h解交联,跑电泳,检测超声破碎的效果。
 
9、在100ul的超声破碎产物中,加入900ulChIPDilutionBuffer和20ul的50×PIC。
 
再各加入60ulProteinAAgarose/SalmonSpermDNA。4oC颠转混匀1h。
 
10、1h后,在4摄氏度静置10min沉淀,700rpm离心1min。
 
11、取上清。各留取20ul做为input。一管中加入1ul抗体,另一管中则不加抗体。4oC颠转过夜。
 
(三)、检验超声破碎的效果。
 
取100ul超声破碎后产物,加入4ul5MNaCl,65oC处理2h解交联。分出一半用酚/氯仿抽提。电泳检测超声效果。
 
第二天:
 
(一)、免疫复合物的沉淀及清洗。
 
12、孵育过夜后,每管中加入60ulProteinAAgarose/SalmonSpermDNA。4oC颠转2h。
 
13、4oC静置10min后,700rpm离心1min。除去上清。
 
14、依次用下列溶液清洗沉淀复合物。清洗的步骤:加入溶液,在4oC颠转10min,4oC静置10min沉淀,700rpm离心1min,除去上清。
 
洗涤溶液:a.low salt wash buffer-one wash
 
b.highsalt wash buffer-one wash
 
c.LiCl wash buffer-one wash
 
d.TE buffer-two wash
 
15、清洗完毕后,开始洗脱。洗脱液的配方:100ul10%SDS,100ul1MNaHCO3,800ulddH2O,共1ml。
 
每管加入250ul洗脱buffer,室温下颠转15min,静置离心后,收集上清。重复洗涤一次。最终的洗脱液为每管500ul。
 
16、解交联:每管中加入20ul 5M NaCl(NaCl终浓度为0.2M)。
 
混匀,65oC解交联过夜。
 
第三天:
 
(一)、DNA样品的回收
 
17、解交联结束后,每管加入1ulRNaseA(MBI),37oC孵育1h。
 
18、每管加入10ul0.5MEDTA,20ul1MTris.HCl(PH6.5),2ul10mg/ml蛋白酶K。45oC处理2h。
 
19、DNA片段的回收----omega胶回收试剂盒。最终的样品溶于100ulddH2O。
公司简介

上海维景生物科技有限公司是一家专注生命科学领域的企业,借助中科院细胞与免疫学实验平台拥有强大的资金背景支持和专业的团队等资源。公司面向全国市场,迅速发展,广纳英才,现已建成专业生命科学产品销售团队,其中大部份是在生命科学市场上工作多年,有丰富的销售经验,也有良好的客户资源,销售渠道全面覆盖华东大部分工业以及科研客户,团队中免疫学及相关专业硕士以上学历人士达50%,有较强的技术支持能力,在针对专业技术服务中能够提供完善周到的专业化服务,对客户在使用产品过程中提出的问题能满意答复,并可及时传递最新的产品技术资料信息。  

上海维景生物是一家面向全国以专业从事免疫学实验服务外包和免疫学试剂代理销售为主的高新技术企业。公司的服务对象主要为医药科研人员、大型制药公司等。

公司专注开展以下五种免疫学实验服务:免疫印迹(Western Blotting)、免疫组织化学(IHC)、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(Co-IP)、染色质免疫共沉淀(ChIP) 绝对保证实验质量,客户满意后才收取尾款。

同时公司还是美国Engibody品牌的全国独家总代理,Engibdoy公司产品专注于表观遗传学、标签抗体、内参抗体及标签抗体偶联beads等领域。其开发的标签抗体偶联agarose beads(affinity gel)在科研以及临床研究中享有很高的声誉,更借助Engibody在标签抗体、内参抗体领域的优势,成为免疫印迹WB和免疫沉淀IP实验试剂的专业供应商。因卓越的产品质量及良好的客户口碑,Engibody敢于执行倒赔政策,抗体承诺客户不满意即可申请无条件全额退款,如若产品质量证实有瑕疵,则除了无条件全额退款以外,还会倒赔客户一定金额。

维景生物是一家专注标签抗体偶联beads(affinity gel),标签抗体,HRP直标标签抗体,内参抗体等抗体销售,及WB,IP,Co-IP,ChIP实验外包服务的高科技生物公司

手机:13817407320(微信同号),咨询 QQ :908869532。


售后服务
联系方式
单位名称:
详细地址:
上海市中山北路3856弄2号中环大厦1114室
qq:
908869532
官网:
联系电话:

021-52682952

Email:

在线询价
*姓名:
*单位:
职位:
*手机:
*邮箱:
地址:
*地区:
资料:
需要
不需要
报价:
需要
不需要
留言:
验证码:
我希望获得多家供应商报价
首页 我的账户 立即询价 电话咨询