荧光免疫斑点（FluoroSpot） 实验
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传统酶联免疫斑点（ELISPOT）检测系统改进和开发。利用荧光染料偶联的检测
抗体，CTL FluoroSpot以ELISPOT 相同的高灵敏度检测分泌的细胞因子或抗体（用
于 B 细胞 FluoroSpot）。
CTL 荧光免疫斑点（FluoroSpot）检测最主要的优势是它们能够在同一孔中
同时检测多种不同的细胞因子（或 B 细胞 FluoroSpot 中分泌的免疫球蛋白类别
和亚类）。ELISPOT 中使用的酶染色底物系统，该方法最多可以同时检测两种分
析物（CTL 双色酶联免疫斑点）。双色酶联 ELISPOT 检测已被证明具有高度的准
确性，并且在灵敏度上与单色检测相当，但 CTL FluoroSpot 在使用 2、3 甚至 4
色已经可行的情况下，它可以为研究人员提供许多优势，同时保留经典 ELISPOT
检测方法的准确性和灵敏度。
CTL 荧光免疫斑点（FluoroSpot）检测的多参数潜力，为研究人员提供了检
查 T 细胞介导的免疫反应的附加功能和定性参数的可能性，并且具有 ELISPOT
相同的易用性和灵敏度。CTL FluoroSpot 测量活化 T 细胞分泌的不同细胞因子和
效应分子，可以提供有关 T 细胞免疫效应谱系的宝贵信息。例如，最近一个越来
越受关注的领域是多功能 T 细胞的研究，这些细胞被证明可以分泌多种不同的细
胞因子。
使用 CTL 的 IFN-γ/IL-2 FluoroSpot 检测系统，可以在同一孔中同时检测分
泌 IFN-γ和 IL-2 的 T 细胞以及同时分泌两种细胞因子的细胞。在这种情况下，分
泌 IFN-γ的细胞会产生绿色斑点，而分泌 IL-2 的细胞会产生红色斑点。分泌两种
分析物的多功能细胞会呈现黄色，因为 IFN-γ和 IL-2 的两个荧光光谱重叠。在
CTL 荧光免疫斑点（FluoroSpot）检测中，抗原特异性 T 细胞对刺激作出反应的
频率反映了 T 细胞免疫的强度，就像在经典的 ELISPOT 检测中一样。CTL
FluoroSpot 荧光免疫斑点分析仪测量的斑点大小和强度记录了单个分泌细胞产
生的细胞因子量。
与 ELISPOT 方法不同，CTL FluoroSpot 检测采用荧光检测方法，通过测量特
定波长的信号强度来量化这些结果。CTL 荧光斑点（FluoroSpot）分析软件可以
量化斑点的大小和强度，为研究人员提供测量和比较单个 T 细胞相对稳定性的方
法。斑点大小也表明了响应 T 细胞的功能性。在多功能 T 细胞以及近期激活的记
忆效应 T 细胞中，斑点的大小和强度可能会增加。同样，在无活力或免疫抑制状
态下，斑点的大小和强度可能会降低。
分泌两种或两种以上细胞因子的多功能 CD8+T 细胞似乎能够提供更高水平
的保护性免疫，而仅分泌一种细胞因子的 CD8+T 细胞在清除病毒方面并不一定
同样有效，在提供针对病毒再次攻击的保护方面也不一定同样有效。分泌 IFN-γ
/IL-2 的多功能 T 细胞数量高与对病毒感染的保护相关，而仅分泌其中一种细胞
因子的细胞与保护无关。因此，控制病毒感染进展的能力与免疫反应的质量（即
CD8+T 细胞对病毒的反应功能）密切相关。IFN-γ、IL-2、TNF-α、MIP-1β共表
达 T 细胞与单一细胞因子产生细胞的高比例与病毒清除和/或疾病不进展密切相
关，因此也与功能性 T 细胞反应密切相关。
这些复杂且相互关联的共表达模式是目前正在深入研究的课题，而 CTL 荧光
免疫斑点（FluoroSpot）非常适合研究此类多功能 T 细胞。CTL 荧光免疫斑点
（FluoroSpot）检测能够在单次检测中清晰地显示并计数多功能 T 细胞和单细胞
因子产生细胞的相对数量。使用具有离散、不重叠波长的荧光标记，可以轻松区
分“单个细胞因子”以及“共同分泌的细胞因子”。
CTL 荧光免疫斑点（FluoroSpot）检测是一种有效的方法，可用于观察和计
数 PBMC 或分离或富集的 CD4+T 细胞群中不同类型的辅助性 T 细胞。CTL 多色
荧光免疫斑点（FluoroSpot）检测还能帮助研究人员在同一孔中简单快速地区分
Th1 和 Th2 型细胞。例如，IFN-γ/IL-4 FluoroSpot 可以区分 Th1 和 Th2 细胞。同
样，还可以观察 Th1 与 Th17 细胞群，或 Th1 与 Treg（Treg）细胞群，并确定每
种类型的频率。
CTL B 细胞荧光斑点（CTL B cell FluoroSpot）
CTL FluoroSpot 检测的另一个应用是检测在同一检测孔中分泌不同免疫球
蛋白(Ig)类别和IgG亚类的抗体分泌细胞群。可以检测不同Ig类和/或子类的频率，
为研究人员提供强大的研究工具。
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