TALEN基因敲除小鼠制备
TALEN(transcription activator-like effector nucleases,TALENs)靶向基因修饰/敲除技术是最近发展起来的一项极具革命性的新技术。用TALEN方法制作knock out小鼠,不需要经过传统敲除所需要的ES细胞打靶阶段,周期大大缩短。相比于ZFN技术,TALEN的优势也非常明显突出,它的识别切割的效率更高,几乎可以靶向任何序列,不受上下游序列的影响。
TAL (transcription activator-like)effectors是细菌Xanthomonas感染植物时分泌的蛋白分子。这些蛋白分子通过其中心区的34个氨基酸的重复序列识别并结合到宿主基因的启动子上,激活植物基因的表达,从而帮助细菌进行感染。TAL effectors的此特征很快被大家认识并利用来作为靶向基因编辑的工具。
TALEN(transcription activator-like effector nucleases,TALENs)靶向基因修饰/敲除技术是最近发展起来的一项极具革命性的新技术。TALEN蛋白分子包含DNA结合域和Fok1核酸酶,两个TALEN分子分别结合到靶点两侧,Fok1形成二聚体并发挥切割作用,生成双链断端,细胞内的非同源性末端接合(Non-homologousend joining, NHEJ)修复机制启动,断口被修复同时随机的删除和插入一定数量的碱基,造成移码导致基因失活。
用TALEN方法制作 knock out小鼠,不需要经过传统敲除所需要的ES细胞打靶阶段,周期大大缩短。相比于ZFN技术,TALEN的优势也非常明显突出,它的识别切割的效率更高,几乎可以靶向任何序列,不受上下游序列的影响。此项技术现已经成功应用于细胞、斑马鱼、果蝇、大鼠、小鼠及植物上,并且被研究者不断地尝试应用到其他更多的物种。此技术为研究者提供了一种新的思路,开辟了一条崭新的道路。
敲除小鼠制作流程
• 分析gene序列,选择靶位点,设计TALEN载体
• 测试TALEN载体的打靶效率
• 受精卵的显微注射,移植
• F0代小鼠的鉴定
• F0代小鼠的遗传检测
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江苏集萃药康生物科技股份有限公司是一家专业从事人源化动物模型与药物筛选平台研发的高科技生物技术企业,成立于2017年。公司团队在模型动物领域拥有近20年经验。公司拥有领先的疾病模型、基因工程小鼠模型研发能力,为全球科研机构、药企提供模型创制、代理繁育、小鼠销售、表型分析、功能药效等一站式服务,是国际上品系数量最多的小鼠模型供应商之一。
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