免疫与抗体

Western Blotting技术服务

基本信息
服务名称:
Western Blotting技术服务
英文名称:
Western Blotting技术服务
参考报价:
总点击数:
1863
更新日期:
2009-09-15
服务类别:

服务详情
Western Blotting技术服务

      WESTERN BLOT是以电泳分离组分,将其从凝胶转移到一种固相支持体,继之以针对特定氨基酸序列的特异性抗体作为探针检测目的蛋白的一种分子生物学技术。 
      免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹(Western blotting),它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。

     尚柏生物(Sunbio)为您提供全套免疫印迹(immunoblotting)技术服务,全部实验皆使用高质量试剂完成
   


  
OPN(Osteopontin) 是一种细胞外基质糖蛋白,上图为OPN在正常及不同病变肾组织中的差异表达情况。
  


 
环氧化物酶(COX)是炎症反应过程中的关键酶,包括COX-1和COX-2。上图为二者在不同浓度药物处理后的鼠大脑内皮细胞中的表达情况。 (以上图片均为SUNBIO生命科学试验中心数据库提供未经允许严禁转载)

主要实验步骤如下: 
1. 蛋白质抽提
    a.实验对象为组织样品,取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样品,加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂),匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。
    b.实验对象为细胞样品,每份样品取1×106~1×107细胞,PBS清洗细胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。 
2. 蛋白质定量
    按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作,测定样品浓度。
3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)  
    将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样,标准加进第一个孔中,电泳分离蛋白。
4. 蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜
    按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层,30mA恒流条件下,4°C转移过夜。
5. 膜的封闭和抗体孵育
    a. 膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
    b. 封闭过的膜加入一级抗体室温孵育1.5小时,抗原抗体结合。 
    c. 加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准,室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。
6. 结果检测
    化学发光法检测,膜与化学发光底物孵育,经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件,并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7. 数据分析
    目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差,所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8. 提供实验报告
   
包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关图表。

客户方需提供
1、 第一抗体(建议客户定购国外公司的一抗,以国外文献中应用的相关第一抗体为佳。
    如Cell signaling technology, Cayman Chemical, Santan Cruz, Zymed等著名抗体公司。)
2、 预实验样本
3、 正式实验样本
    同时希望客户能提供相应的背景材料以利实验顺利完成,背景材料包括:样本描述,目的蛋白相关资料,必要的相关实验设计内容如阳性对照等等。
★ 公司方提供
1、 预实验结果
2、 正式实验结果
   如客户只需要进行预实验研究,我方可只代理预实验业务并提供结果。
★ 实验周期与费用
    预实验的费用以欲检测目的蛋白的种类数目(或第一抗体种类数目)计算,公司将在材料和实验经费全部到位的工作日后15个工作日之内提交实验结果。正式实验费用欲检测目的蛋白的种类数目(或第一抗体种类数目)和样本数为单位计算,实验周期为20个工作日,公司将在材料和预付的实验经费全部到位的工作日后20个工作日之内提交实验结果。如客户要求在10个工作日之内完成,每单位样品费用为常规周期的两倍。实验结果以胶片的形式提交给客户,客户需在收到实验结果后一周内付清所有剩余款项。                                             

收费标准

项目
价格
总蛋白质提取
50 元每个样品
WB 实验费
每张膜可做1-8个样品  1500元/膜
WB 预实验费
600元每个指标

公司简介

尚柏生物医学技术(北京)有限公司创建于2000年,已经获得国家经营三类医疗器械许可(证号:京081876)和北京市科学技术委员会认定的高新技术企业(统一编号:0611008A21672)。公司总部位于高校云集的北京市海淀区中关村科技园区,座落于中国铁路建设总公司铁建医院。与军事医学科学院、301医院、305医院等国内外知名的科研单位和医院紧密为邻。2007年7月11日,SUNBIO正式被北京中医药大学授权为"国家基础医学与生命科学人才培养实训基地",SUNB IO不断积累和总结实习带教经验,使学生的理论知识和人生阅历通过SUNBIO这个平台得到实践和丰富。SUNBIO将不断加强实训基地的基础设施和人才队伍的建设,逐步完善实习教学模式,争取成为更多基础医学、生命科学教学示范单位的人才培养基地。

尚柏生物致力于尖端免疫学和分子生物学技术在科研中的应用与推广,专业从事免疫检测及其他相关产品的引进、服务和研发。目前已经拥有自主知识产权专利产品6项。尚柏生物公司是一家深受客户信任的高质量服务供应商,通过高度细分、全方位的服务平台,向生物制药和医疗仪器公司提供生物医学产品测试,合同研究及开发,以及生物 cGMP 生产服务。

SUNBIO生命科学实验中心作为尚柏生物的核心技术平台,由加拿大籍华人投资人民币800万元,拥有专业的实验室、洁净的动物房和一流的实验设备(实验室总面积达200平方米拥有仪器设备20余台,较大型仪器设备有:荧光定量PCR仪器、CO2培养箱、超低温冰箱、荧光显微镜、高速冷冻离心机、PCR仪、垂直电泳仪、自动生化分析仪、紫外分光光度计、酶标仪、超净工作台等)和经验丰富的技术人员,其中助理研究员(博士)4人,实验师(硕士)12人,已经发表的SCI文章6篇,国家核心期刊文章20余篇,完整的实验记录多达5000多份。科研项目涵盖临床医学、免疫学、细胞生物学、分子生物学等生命科学诸多领域,具体的实验方法有:普通PCR、荧光定量PCR(real-time PCR)、Western印迹、流式、ELISA、免疫组化、细胞培养、MTT、放免、实验动物饲养及造模等。同时本实验室人员有丰富的新药研发企业工作经验,能够承担新药药效学及毒理学实验,提供新药申报资料、文献查询及综述内容的整理服务。

SUNBIO生命科学翻译中心作为尚柏生物旗下全资子公司,专门从事医学、医药类口笔译的专业化翻译公司长期以来,SUNBIO翻译中心为卫生部、药品监督管理局下属多家单位及多家著名跨国医药企业提供口、笔译服务,获得一致好评。SUNBIO翻译中心以国内知名医科、药科院校,科研院、研究所翻译专家、教授,医学博士,药学博士及外籍(美、英、德、日、韩等)专家为主要依托,云集国内中西医专业翻译人才,以及国外留学回国人员,致力于国内外中西医基础理论、医疗、制药、生物技术、医疗器械、化妆品、食品卫生、兽医等医药相关行业的专业化翻译服务。SUNBIO翻译中心可提供英、日、韩、法、德、俄、意、西班牙等十余种语言的口译、笔译服务。SUNBIO翻译中心坚持奉行“专业、严谨、快捷”的宗旨,凭借装备精良的专业化翻译队伍,以SUNBIO严谨的作风,为客户提供快捷、足不出户的翻译产品和服务。SUNBIO翻译中心视质量为企业生存之根,效率为生存之本,按照GB/T19002-1994 idt IS9002:1994 标准的要求,建 立了先进的质量管理体系和内部管理制度,并全面运用全球最先进的塔多思(TRADOS)翻译记忆软件,以及Freehand、Pagemaker、CorelDraw等制图排版软件,竭诚为海内外广大客户提供最佳的专业化翻译产品和高品质的翻译服务。

公司充分依托装备精良的研究平台,结合自身的技术优势和精良的人力资源,始终不懈的跟踪生命科学领域发展的最前沿。目前,公司承担众多科研院校的国家863、973等科研项目的技术服务,通过我们的高效服务,全国众多客户在EJP, JBC等杂志上发表了影响因子较高的SCI论文。协助近百名研究生进行科研选题和课题合作服务,这些研究生在毕业答辩时都获得了答辩组专家好评,其中一位已获得全国优秀博士论文荣誉。

我们所做的一切都是为了使您的工作更轻松、更快捷。良知使我们不断拿出和引进更好的产品,控制和降低各种成本,为您的研究加油,加速我国自有成果的开发,最终摆脱对进口产品的依赖。这是一项长期艰苦的工作,这是一项光荣伟大的工作,这是我们继续发展的动力。


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