转基因

基因敲除大、小鼠模型的定制服务

基本信息
服务名称：
基因敲除大、小鼠模型的定制服务
英文名称：
参考报价：
服务商：
康威达基因科技有限公司
总点击数：
1824
更新日期：
2013-07-29
服务类别：
转基因
服务详情

康威达基因科技有限公司目前通过优化的TALEN技术通过注射受精卵的方式实现大、小鼠的基因打靶。相比传统的技术效率更高，胚胎干细胞系容易建立。已成功开发出76种基因敲除大鼠品系，包括APOE、LDLR、APP、HTT、Leptin、P53等经典疾病模型，另外已拥有超过500种基因敲除小鼠品系。

TALEN基因敲除基本流程：

1. 确定靶点：选择目标基因外显子中相隔17-18bp的两段14-18bp序列作为靶点

2. TAL靶点识别域的克隆构建
3. 将TAL靶点识别域克隆入特定的真核表达载体
4. 将重组真核表达质粒转入（卵）细胞以表达重组核酸酶，敲除基因
5. 筛选突变体
TALEN的构建
    TALEN由四部分组成：N端序列，RVDs，C端序列，FokI。利用Type II 限制性内切酶可以将RVD模块分别生成不同的粘性末端，同时又不留有酶切位点，通过GoldenGate反应实现RVDs与TALEN骨架的无缝连接。
TALEN的蛋白质表达鉴定
    TALEN构建成功后，将其质粒转染大鼠细胞系后，提取总蛋白，进行SDS-PAGE电泳，利用标签抗体进行western blotting检测其表达。
TALEN的体外活性检测
1）套峰检测
    TALEN质粒转染大鼠细胞系，1~2天后提取细胞基因组DNA，PCR扩增靶位点序列，进行DNA测序，通过spacer区域出现套峰情况评价TALEN的活性。
2）错配酶检测
    将靶序列PCR扩增子进行变性-退火，进行错配酶（MSDase）反应，将MSDase的消化产物进行电泳，通过比较切割条带与非切割条带的比例，即可反映出TALEN的活性高低。
受精卵注射及基因敲除大鼠的基因型鉴定
    利用体外转录试剂盒将有活性的TALEN分别体外转录为mRNA后进行受精卵注射。将打靶的胚胎移植到代孕母鼠的输卵管，经过21-23天的孕育后F0代基因敲除大鼠出生，并进行基因型鉴定。

公司简介

康威达基因科技有限公司是由一批拥有欧美留学工作经历的高层次人才创立的高科技企业。企业核心团队具有多年生物医药、模式动物和疾病模型的研发经验和技术。公司的目标是为国内外客户提供专业、快速、高质量的基因敲除和转基因大、小鼠以及基因工程兔模型，并为医学、药学、生命科学研究提供多种疾病模型动物的定制、各种抗体及病毒试剂盒制备、课题合作等服务。 
康威达公司建有成熟系统的基因打靶载体构建技术和专业的显微注射平台，确保快速、高效地开展转基因和基因敲除大鼠、小鼠、兔的开发与服务。公司尤其在基因敲除大鼠研制方面具有独特的优势，具备在短期内获得基因敲除大鼠的能力。迄今为止，已经成功地研发出500多种转基因及基因敲除小鼠品系，76种基因敲除大鼠品系，6种基因敲除兔，技术达到国际顶尖水平。公司已为Harvard University、Yale University、University of Toronto、King‘s College London、Temple University、University of Cincinnati、Astrazeneca Public Limited Company、北京大学、清华大学、上海交通大学、复旦大学、武汉大学、华中科技大学、第四军医大学等国内外顶尖研发机构的相关实验室提供服务，并获得了普遍好评。

公司始终把提供专业、高效的服务和优质的产品放在企业发展的首位。我们将不断丰富产品、完善服务、加快技术革新，满足市场和用户新的需求新的需求。

企业文化： 激 情；严 谨； 奋 进；创 新

企业理念： 承载“为科研创造价值”的梦想！ 全力以赴为客户服务！从它的发展强大中获得到自己的成就！
 

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