稳定细胞株构建
稳定细胞株构建服务:
构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)和嘌呤霉素(puromycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选,筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
稳定细胞株的构建周期长、难度大,每一步都很关键,尤其是细胞转染,常用物理方法(电转)、化学方法(脂质体等)、生物方法(病毒),根据不同的实验条件,选择最好的方法,来达到实验目的。
科佰生物在稳定细胞株构建上拥有丰富的经验,熟悉每一步操作,尤其对关键步骤有独到的经验,成功为众多科研客户构建目的细胞株(过表达、可诱导过表达、沉默、可诱导沉默、报告基因等等)。
蛋白过表达稳定细胞株:
目的蛋白的过表达往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段,也是借助表达系统富集蛋白(DHFR、GS system)的方法。蛋白过表达稳定细胞株的构建能很好的帮助研究这个蛋白,或者得到大量的目的蛋白。
科佰生物提供的蛋白过表达稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统,构建含有目的基因CDS的质粒/病毒,通过转染/感染在各种细胞基因组上整合目的基因,利用抗生素筛选,得到稳定表达的高拷贝克隆,经过32代的稳定性QC检测,完成稳定细胞株的构建工作。
主要包含如下步骤:
1. 载体构建(表达质粒载体、病毒载体);
2. 转染/感染;
3. 目的蛋白初步检测;
4. 抗生素筛选;
5. 目的蛋白再次检测(定性/半定量);
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
特殊的过表达蛋白/细胞,请事先咨询。
基因沉默稳定细胞株:
目的蛋白的沉默(knock-down or knock-out)往往是研究该基因/蛋白功能的常规手段,蛋白沉默后细胞表型的检测是科研的金标准方法。
科佰生物提供的蛋白沉默稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统,构建含有沉默目的基因(shRNA/microRNA)的质粒/病毒,通过转染/感染在各种细胞基因组上整合沉默基因,利用抗生素筛选,得到高效沉默的克隆,经过32代的稳定性QC检测,完成稳定细胞株的构建工作。
主要包含如下步骤:
1. 载体构建(沉默质粒载体、病毒载体);
2. 转染/感染;
3. 目的蛋白初步检测;
4. 抗生素筛选;
5. 目的蛋白再次检测(定性/半定量);
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
特殊的过表达蛋白/细胞,请事先咨询。
蛋白表达诱导系统:
外源蛋白的诱导表达/沉默能很好比较本底和干预的区别,非常有力的诠释目的基因/蛋白的作用机理,特别适合研究自身具有毒性的蛋白,现已经被广泛使用。
科佰生物提供可诱导蛋白表达/沉默稳定细胞株构建服务借助于真核表达载体/慢病毒系统,构建含有“开关”控制表达/沉默目的基因的质粒/病毒,通过转染/感染在各种细胞基因组上整合载体,利用抗生素筛选,得到可诱导的稳定细胞株,经过32代的稳定性QC检测,完成稳定细胞株的构建工作。
主要包含如下步骤:
1. 载体构建(诱导质粒载体、病毒载体);
2. 转染/感染;
3. “开关”诱导下目的蛋白初步检测;
4. 抗生素筛选;
5. “开关”目的蛋白再次检测(定性/半定量);
6. 单克隆细胞株稳定性检测。
特殊的过表达蛋白/细胞,请事先咨询。
服务说明:
1. 稳定细胞株构建依据目的不一样,方案差异非常大,成功率差异也很大,本着对客户负责的态度,建议事先咨询,并且安排预实验;
2. 客户可以提供基因序列、载体、细胞,也可以查找本公司模板库、载体库、细胞库,也可以由我们公司代购;
3. 本服务仅对目的基因的表达、稳定性做保证,不涉及基因功能,具体基因功能检测,需要另外评估和收费;
提交的产品和资料:
1. 构建好的质粒(4ug)/病毒(1ml),含目的基因序列/沉默序列/诱导序列;
2. 稳定细胞株2管;
3. 实验报告。
科佰生物科技有限公司是一家专业提供生命科学研究服务外包,生物试剂、耗材销售的综合型公司。公司在多年的发展历程中,逐步建立起分子生物学、蛋白工程、病毒包装、抗体工程、细胞工程、药物研发等一系列平台,与上海张江药谷、苏州纳米园建立了稳定的合作关系,同时公司与国内外知名产品供应商签署贸易协议,成为一线品牌的代理商、经销商。
为节约客户的时间,提升科研服务的质量,公司出资筹建现货产品库,包括ORF库、载体库、抗体库、细胞库、病毒库,已经建成1000+的ORF库,全部经过测序验证;80+载体库,全部经过实验验证;300+抗体库,全部经过预实验验证;200+细胞库,全部来源于ATCC/ECACC等正规机构;100+的病毒库,全部现货可用。
公司拥有全球领先的硬件设备,包括荧光定量PCR仪、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、高通量筛选仪、高内涵筛选仪、液体工作站、HPLC、质谱、akata、超速离心机、冷冻离心机、多款多功能酶标仪、洗板机、生物安全柜、CO2培养箱等等,基于如此强大的平台,充分保证了科研数据的质量,进而保证了论文的质量。
公司的团队主要由国内外知名大学毕业的硕士、博士组成,具备化学、生物学、医学、药学等相关专业背景,大部份员工有多年在CRO公司或者国内外药企工作的经验,具有更专业的生命科学背景和更强烈的客户服务意识。
公司秉承“客户第一”的理念,旨在全力为客户排忧解难,与客户发展长期的合作关系,做到让客户满意,做到公司利益和客户利益相统一。同时公司重视人才培养,除了专业能力的不断培养外,更重要的是培养员工的使命感及开拓创新精神,只有有主人翁意识的员工,只有不断创新的员工,公司才能生存,才能发展。
公司立足现有的技术优势、客户优势、成本优势,通过公司全体员工的一致努力,立志成为一流的科研外包服务企业和自主专利研发产品的生产企业,进而能在药物研发上有所建树。
技术服务列表:
1.分子生物学:基因合成、引物合成、基因测序、核酸提取、载体构建、质粒抽提、PCR、Q-PCR、RT-PCR、定点突变、定点整合、定点敲除、甲基化检测、SNP检测等等
2.蛋白工程:原核、酵母、昆虫、哺乳动物蛋白表达系统
3.病毒包装:腺病毒、慢病毒
4.抗体工程:WB、ELISA、IP、IF、IHC、FACS、Confocal、磁珠分选、病理染色
5.细胞工程:细胞培养、细胞膜制备、稳定细胞株构建、细胞RNAi技术、细胞表型分析(凋亡、增殖、周期、迁移、侵袭、修复、克隆形成)
6.药物研发:GPCR、Kinase、Protease、Ionchannel、Nuclearreceptor
7.数据统计与分析
8.论文翻译与润色
产品列表:
1.代理、经销国内外一线品牌产品
2.自主研发专利产品
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南京市中山北路288号
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