分子与细胞

标记定量蛋白质组(iTRAQ和TMT)

基本信息
服务名称:
标记定量蛋白质组(iTRAQ和TMT)
英文名称:
Labeling quantitative proteomics
参考报价:
总点击数:
1192
更新日期:
2015-01-08
服务类别:

服务详情

简介

iTRAQ和TMT是目前运用最广泛的两种标记定量蛋白质组技术,分别通过与氨基酸末端氨基以及赖氨酸残基的游离氨基结合,实现对多肽的标记,并通过不同分子量的试剂对不同来源样品进行标记的方式实现不同样品间蛋白质组比较的目标。以iTRAQ试剂为例,该试剂结构由指示基团、中性平衡基团和反应基团三部分组成。不同指示基团及其相对应平衡基团的质量和都相同,而反应基团能与赖氨酸ε氨基和所有肽链的氨基末端连接,可标记所有氨基酸。不同标记试剂与来源于不同样品胰酶消化后的肽段结合,经过色谱分离,并通过一级质谱和二级质谱。平衡基团在二级质谱时发生中性丢失,而报告基团在二级质谱低质量区域产生多个报告离子,其信号强度分别代表该标记样品的表达量,根据报告离子的峰面积计算同一蛋白质同一肽段在不同样品间的比值,从而实现蛋白的相对和绝对定量。


技术流程

标准iTRAQ和TMT分析
1  通量高
 可以同时进行8个样品(iTRAQ)或10个样品(TMT)的分离鉴定和定量,提高了实验通量,可以进行多个时间点蛋白质组的动态监测
2  重复性好
  来源不同的样品可以同时进行色谱分离和质谱鉴定,大大增强实验的重复性,最低可以检测到不同样品间5%的蛋白差异变化
3  分辨率高、定量准确
  AB SCIEX公司的TripleTOF 5600系统和Thermo公司的Q-Exactive系统是世界上极少数具有准确质量数与高分辨率进行同时定量和定性分析的LC-MSMS系统。最先进的仪器再配上iTRAQ试剂和TMT试剂本身基于报告离子的定量原理和高达99%的蛋白标记效率,使得鉴定到的蛋白数量更多,同时也保证了结果的可靠性
4  鉴定结果可靠、蛋白检测范围广
 二级质谱可以产生很好的y、b离子系列,蛋白序列覆盖率提高,鉴定结果更可靠,同时一个蛋白质有多个肽段被鉴定,进一步提高了定量的准确性。此外,iTRAQ和TMT实验在肽段水平进行蛋白分离和鉴定,大大提高膜蛋白等难溶性蛋白的溶解性,扩大蛋白检测范围

磷酸化iTRAQ和TMT分析
1  富集效率高、费用低
  采用亲和纳米特异地富集磷酸化肽,具有很好的磷酸化肽结合能力,富集效率高,同时考虑到磷酸化肽的复杂程度相对于总蛋白样品而言较低,所以采用一维LC-MSMS的方式进行分离鉴定即可获得较理想效果,减少了工作量,降低了实验费用
2  定量结果可靠 
  较高的富集效率以及两步即可实现磷酸化肽富集的操作步骤,有助于提高实验结果的一致性,并最终提高定量结果的可靠性,使发现的不同样 品间的磷酸化肽差异更接近真实状态

技术服务内容
1、蛋白样品制备,定量,酶解,标记
2、反相色谱分离,强阳离子交换色谱分离
3、串联质谱定量与定性,数据库检索
4、相关生物信息学分析
5、实验报告提交
五、送样须知
1、样品要求:不同样品所需的量不同,详细请咨询本公司。
2、寄送须知:样品需低温保存的,用干冰保存快递。
3、样品登记表格下载:寄样之前请下载附件的样品登记表,填写样品信息打印出来随样品一起寄出。
六、实验周期和收费标准:咨询本公司
公司简介

浙江欧胜生物科技有限公司(欧胜多维组学技术服务与产品研发中心)是以来自欧美的海归博士为团队核心,联合国内名校研究人员共同创立的专注于生命科学和生物技术领域的高科技企业。公司以来自欧美,更胜一筹为理念,力求把欧美高端的技术服务和产品开发能力带回国内。公司总部位于浙江的归谷创业园区,已在上海建立近千平米实验室并设有办事处,主要从事以代谢组学技术服务以及分子标志物开发为基础的,包括蛋白质组、多肽组、生物信息学分析在内的多方面系统生物学技术服务及研究咨询。目前与欧胜生物合作的国内外客户已逾600位,涉及医学、农业、生态学及工业应用等多个研究领域,发表SCI论文200多篇,充分展现了欧胜生物的专业能力。


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