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EMSA和DNase I Footprinting服务

基本信息
服务名称:
EMSA和DNase I Footprinting服务
英文名称:
参考报价:
总点击数:
1794
更新日期:
2015-04-05
服务类别:

服务详情

凝胶迁移或电泳迁移率实验是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前也用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

原理:蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白,并可通过加入特异性的抗体(supershift)来检测特定的蛋白质,并可进行未知蛋白的鉴定。

目前,公司提供探针的标记方法包括:荧光标记(DNA)或者Biotin标记(RNA)的方法。欢迎来电来信咨询。

 

方法原理:

先将待测双链DNA片段中一条单链的一端选择性地进行末端标记,然后加入恰当浓度的DNaseⅠ,使在DNA链上随机形成缺口,经变性后电泳分离,放射自显影,即可形成以相差一个核苷酸为梯度的DNA条带。但当DNA片段与相应的序列特异性DNA结合蛋白结合后,DNA结合蛋白可保护相应的DNA序列不受DNaseⅠ的攻击,因而在放射自显影图谱上,DNA梯度条带在相应于DNA结合蛋白的结合区域中断,从而形成一空白区域,恰似蛋白质在DNA上留下的足迹,因而被形象地称作足迹法。如果同时进行DNA化学测序,即可判断出结合区的精确顺序。

DNase I足迹试验是一种鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上结合位点的方法,它不仅能找到与特异性DNA结合的目标蛋白,而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。

DNase I足迹试验定义

蛋白质结合在DNA片段上,能保护结合部位不被DNase破坏,DNA分子经酶切作用后遗留下该片段(亦称“足迹”),进而可以确定它的序列。在电泳凝胶的放射性自显影图片上,相应于蛋白质结合的部位没有放射性标记条带。

DNase I足迹试验是一种鉴别RNA聚合酶等蛋白质在DNA上结合位点的方法,它不仅能找到与特异性DNA结合的目标蛋白,而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。足迹试验的方法较多,常用的有DNase I足迹试验和硫酸二甲酯足迹试验(dimethylsulfate,DMS),两者原理基本相同。

DNase I足迹试验的实验流程

DNase I足迹试验的实验流程如下:①待检双链DNA分子用P作末端标记,通常只标记一端;②蛋白质与DNA混合,等两者结合后,加入适量的DNase I,消化DNA分子,控制酶的用量,使之达到每个DNA分子只发生一次磷酸二酯键断裂,并列设置未加蛋白质的对照;③从DNA上除去蛋白质,将变性的DNA加样在测序凝胶中作电泳和放射性自显影,与对照组相比后解读出足迹部位的核苷酸序列。

公司简介

南京百思禾生物科技有限公司是一家高科技生物企业,进行生物仪器试剂的研发和销售,公司秉承开拓进取,求实创新的理念,立志科技创新,坚持以诚为本,推进顾客成功的原则。将永远以优质的产品,优惠的价格,和优异的科研成果加之优秀的服务为广大科研工作者作出积极的贡献。百思禾生物科技有限公司热忱欢迎您前来洽谈业务,共谋发展!


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