钠通道
详细说明
表达各种钠离子通道亚型的稳定细胞系信息如下
钠通道稳定表达的HEK293细胞系在含有10% 胎牛血清及1.2mg/ml G418的DMEM培养基中培养，培养温度为37℃，二氧化碳浓度为5%。
细胞传代：除去旧培养基并用PBS洗一次，然后加入1 ml TrypLE? Express溶液，37°C孵育1分钟。当细胞从皿底脱离，加入5 ml 37°C预热的完全培养基。将细胞悬液用吸管轻轻吹打使聚集的细胞分离。将细胞悬液转移至无菌的离心管中，1000rmp离心5分钟收集细胞。扩增或维持培养，将细胞接种于10厘米细胞培养皿，每个细胞培养皿，接种细胞量为3.5*105 cells（最终体积：10 ml）。
为维持细胞的电生理活性，细胞密度必须不能超过80%。
膜片钳检测，实验之前细胞用TrypLE? Express分离，将3*103 细胞铺到盖玻片上，在24孔板中培养（最终体积：500μl），18个小时后，进实验检测。
电生理检测方法
用微电极拉制仪（P97，Sutter Instruments）将毛细玻璃管（BF150-86-10，Sutter Instruments）拉制成记录电极。在倒置显微镜（IX71，Olympus）下操纵微电极操纵仪（MP285，Sutter Instruments）将记录电极接触到细胞上，给予负压抽吸，形成GΩ封接。形成GΩ封接后进行快速电容补偿，然后继续给予负压，吸破细胞膜，形成全细胞记录模式。然后进行慢速电容的补偿并记录膜电容及串联电阻。不给予漏电补偿。当全细胞记录的电流稳定后开始给药，每个药物浓度作用至5分钟后检测下一个浓度，在记录期间独立重复检测多个细胞。所有电生理实验均在室温下进行。实验数据由 EPC-10 放大器(HEKA)进行采集并储存于PatchMaster (HEKA)软件中。
检测实验的刺激方案：
检测化合物对钠离子通道的作用，首先将细胞的膜电位维持在-90mV, 然后去极化到-10mV 持续50ms以激活钠电流. 在整个药物作用中一直运行本刺激方案，具体去极化的电压值在每次测试前由IV曲线的测试获得，会有所调整。
数据质量标准
(1) 串联电阻 ≤ 20 MΩ；
(2) 封接电阻 ≥ 1 GΩ；
(3) 起始电流幅度适宜；
(4) 电流没有明显的自发性衰减(5分钟内自发性衰减小于5%)；
(5) 在膜电位为-80mV下无明显的漏电流 (漏电流 ≤ 100 pA)。
数据分析
首先将每一个药物浓度作用后的电流和空白对照电流标准化，然后计算每一个药物浓度对应的效应，具体计算方法如下：
ICE NaV channel stable expression cell lines:
2. NaV1.2
北京爱思益普生物科技有限责任公司是归国留学人员创办的技术型创业企业，位于北京中关村生命科技园区，是一家以药物合同研发为主要业务的生物科技公司。北京爱思益普生物科技有限责任公司是国内首家致力于离子通道相关的药物合同研发企业，是国内离子通道药物研究的先行者。公司建立了与hERG钾通道相关的药物心脏安全性筛选研究以及基于细胞和分子水平的心血管系统、神经系统离子通道药物发现性研究的筛选平台。同时，我们还致力于为顾客提供高质量，个性化的功能性检测模型建立和药物筛选服务，如GPCR，蛋白酶/蛋白激酶，ADME，体外细胞毒，以及药效学，毒理学等服务。我们的管理及技术团队均具有海外工作经历，所有的项目负责人均有欧洲或北美的博士学位。我们以高效，可靠的离子通道药物研究，药物高通量筛选以及药理学研究为全球制药业服务。我们我们致力于提供优质，灵活的方式，通过定制标准化的药理学研究提供高效率和低成本的服务，所有的实验均遵守GLP规范的要求。我们建立了以客户为中心的专业研发团队，以满足客户的研究需求。
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