奥地利 O2k多维度能量代谢/氧化磷酸化实验服务
复合物 I( complex I)其功能障碍会引起细胞呼吸作用至少 40%的衰减,进而导致多种疾病,诸如阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、嗜酸细胞型腺瘤、遗传性视神经病变、婴儿致死性线粒体病、Leigh 综合征、糖尿病以及肥厚型心肌病等。
复合物 II( complex II)琥珀酸脱氢酶的突变和异常往往与多种疾病有关,常见包括:副神经节瘤(PGL)和嗜铬细胞瘤(PHEO)、胃肠道间质瘤 (GIST)、肾细胞癌、 Leigh 综合征等。
复合物 III( complex III)的功能缺陷将引起肺动脉高压、人类 CIII 缺陷症、 GRACILE 综合征、脑病、Leber 遗传性视神经病变、心肌病和肌病等。
复合物 IV( complex IV)调节氧化磷酸化、质子泵效率;ATP 和活性氧产生的中心位点;又影响细胞信号传导和存活,复合物 IV 的缺陷已被证明会导致许多疾病,包括 Leber 遗传性视神经病变,Leigh 综合征,复发性肌红蛋白尿线粒体疾病,耳聋感音神经性线粒体疾病和结直肠癌、年龄依赖性肥胖、新生儿呼吸窘迫综合征、亨廷顿舞蹈症等
NADH在调节细胞代谢和能量平衡方面起着重要作用。
辅酶 Q(10)缺乏症在临床和遗传上是异质性的。该综合征与五种主要临床表型有关:(1)脑肌病,(2)严重婴儿多系统疾病,(3)小脑性共济失调,(4)孤立性肌病,(5)肾病综合征。呼吸链缺陷、活性氧的产生和细胞凋亡在原发性辅酶 Q(10)缺陷的发病机制中起着不同的作用。
O2k一次实验可无限次加药获得更多能量代谢数值
实验样本:骨骼肌
实验流程(部分):加入复合物I的底物谷氨酸和苹果酸,检测由于质子泄漏导致的复合物I(CI)相关底物氧化的基础状态。加入ADP检测CI相关的氧化磷酸化,添加琥珀酸后,检测的OXPHOS情况。添加细胞色素C来确认线粒体膜的完整性,所有的样本从未达到10%的截止点,表明线粒体在渗透过程中没有受到损伤。加入鱼藤酮抑制CI后,检测CII相关的OXPHOS水平。分别加入抗霉素和寡霉素,以测定非线粒体呼吸,最后加入TMPD-抗坏血酸检测未偶联的CIV情况。
实验检测指标包含:耗氧率+活性氧(ROS)/复合体 I 主导的质子漏功能-CI Leak、复合体 I 功能-CI OXPHOS、复合体 I+II 功能-CI+CII OXPHOS、最大耗氧- CI+CII ETS (Maximum respiration)、解偶联下的复合体 II 功能-CII ETS、非线粒体耗氧-Rox (Non-mitochondrial respiration)、复合体 IV 功能、活性氧-ROS
实验结果:仅单独给药EC可在4天内诱导乳腺癌患者骨骼肌萎缩,通过Oroboros O2K检测发现骨骼肌细胞线粒体功能减退,线粒体复合体I(CI),复合体II(CII)以及CI+CII相关的氧化磷酸化能力减弱。
实验样本:血小板
实验流程(部分):通过奥地利Oroboros高精度氧化磷酸化功能表征系统对血小板线粒体功能进行表征分析,用NSA(MLKL抑制剂)预孵育组和未添加NSA的对照血小板(DMSO)组相比,耗氧率(Oxygen Consumption rate)几乎没有变化;添加凝血酶(Thrombin)后,发现NSA处理组耗氧率激增量显著低于DMSO对照组,说明MLKL促进了线粒体电子传递的作用;添加寡霉素(Oligomycin,复合体V抑制剂)后,发现NSA处理组耗氧率降低量显著低于DMSO对照组,表明NSA处理组的氧化磷酸化(OXPHOS)水平显著低于DMSO对照组,说明在NSA存在的情况下,凝血酶诱导的血小板OXPHOS功能显著受损;同时也发现添加寡霉素后,NSA处理组质子泄漏(Proton leak)水平显著高于DMSO对照组,由于质子泄漏代表不依赖于复合体V的质子驱动的氧气消耗,表明MLKL对线粒体内膜的稳定作用,抑制质子泄漏。
实验结果:抑制MLKL也促使受刺激血小板中线粒体氧化磷酸化和有氧糖酵解受损,同时伴有线粒体跨膜电位的破坏、质子泄漏增加、线粒体钙和ROS下降。
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