实验介绍

重叠延伸PCR法（gene splicing by overlap extension PCR，SOE PCR）是指在PCR技术的基础上，采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成了重叠链，通过重叠链的延伸，将不同来源的片段重叠拼接起来的方法，利用该原理，可通过三步PCR程序实现针大片段的缺失或插入。

全质粒PCR定点突变是指通过PCR方法向质粒中的目的DNA片段中引入所需变化，包括碱基的添加、删除、点突变。利用该方法既可以实现单点突变，也可以实现多点突变，目前常用的方法是采用stratagene公司的QuikChange Site-directed Mutagenesis kit或QuikChange Multi Site-directed Mutagenesis kit来完成。突变引物的设计及突变PCR反应为定点突变能否成功的关键影响因素。

服务流程

客户提供

●   测序确认的野生型质粒（可由我司代购）、图谱及插入位点

●   待突变位点、突变后序列及载体信息

●   目的基因序列信息或基因名称或序列号

服务优势

●   可实现长序列（＞10kb）的点突变

●   可对高GC、重复、发卡结构进行突变

北京健坤禾润科技有限公司（以下简称“健坤禾润”）成立于2011年4月，是一家提供专业医学科研服务咨询及技术服务的转化医学平台。

健坤禾润建有标准化的实验室，独立拥有一系列先进的硬件设施，包括confocal、流式仪、发光检测仪、MD酶标仪、实时定量PCR仪、独立细胞室、荧光显微镜等，并开展各种细胞原代分离、细胞处理、分子生物学、免疫生物学等研究，在细胞生物学、免疫学、分子生物学、蛋白质组学等领域已形成了专业优势。

健坤禾润拥有博士后、博士等一批专注于机制研究的科研人员。除单项技术服务之外，健坤禾润还可以为广大临床客户和科研工作者提供转化医学整体项目的方案设计、实验实施、数据分析、报告总结等一站式科研咨询和技术服务，目前我们已经与全国知名三甲医院、高校和科研院所建立了长期技术合作关系。

健坤禾润密切关注和跟踪国内外各个医学学科的研究动态与进展，用科研机制的方式验证、阐述疾病机理，提升科研的创新性和连续性。

服务内容涉及

分子生物学

qPCR；定点突变；多重PCR；数字PCR；SNP分型；核酸提取与纯化；基因克隆与表达质粒的构建

细胞生物学

细胞活力/增殖/凋亡/周期；细胞分离培养；荧光素酶报告基因试验；CRISPR/Cas9（细胞）；细胞转染/稳定细胞株构建；细胞共培养；细胞及亚细胞形态结构观测；EMT相关检测

免疫生物学

免疫组织化学（IHC）; ChIP/ChIP-seq/EMSA；Western-Blotting；免疫荧光（IF）；原位杂交（In Situ Hybridization）；IP/CoIP/CoIP-MS；酶联免疫吸附反应（ELISA）

蛋白质组学

蛋白芯片检测；蛋白质谱鉴定与序列测定；iTRAQ；双向凝胶电泳

官网：http://www.jkgreentech.com/

联系电话：010-88857418/19

地址：北京市大兴区生物医药基地天荣大街19号7栋五层
邮编：102600
乘车路线：地铁4号线生物医药基地站西南口出，沿永兴路步行至天荣大街，向南行500m，化大天荣院内南楼五层