慢病毒包装
慢病毒简介:
慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的儿率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。
所以,在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。
慢病毒包装系统组成:
慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。
慢病毒表达载体,即通常所说的穿梭载体,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装, 包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染。
现在的慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。
赢润生物慢病毒包装系统:
目前市面上常见的商业化慢病毒包装系统较多,其中常用的有Clontech 、Invitrogen 等公司的相关产品。赢润生物通过大量实验摸索,博采众家之长,建立起了一套稳定、可靠、高效的慢病毒包装系统。这套慢病毒包装系统, 其穿梭载体主要来自Clontech公司,包括以下载体:
载体名称 |
出品公司 |
用途 |
启动子 |
荧光标记 |
真核筛选标记 |
---|---|---|---|---|---|
pLVX-DsRed-Monomer-Nl |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
DsRed-Monomer |
Puro |
pLVX-AcGFPI-N1 |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
AcGFP1 |
Puro |
pLVX-IRES-tdTomato |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
tdTomato |
无 |
pLVX-lRES-ZsGreen1 |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
ZsGreen1 |
无 |
pLVX-lRES-Neo |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
无 |
Neo |
pLVX-lRES-puro |
Clontech |
表达基因 |
CMV |
无 |
Puro |
pLVX-ZsGreenl-Neo |
Yrbio |
表达miRNA |
CMV |
EGFP |
Neo |
pLVX-ZsGreenl-puro |
Yrbio |
表达miRNA |
CMV |
EGFP |
Puro |
pLVX-shRNA1 |
Clontech |
表达shRNA |
hU6 |
无 |
Puro |
pLVX-shRNA2 |
Clontech |
表达shRNA |
hU6 |
ZsGreen1 |
无 |
pLVX-shRNA3 |
Yrbio |
表达shRNA |
hU6 |
无 |
Neo |
pLVX-shRNA4 |
Yrbio |
表达shRNA |
hU6 |
ZsGreen1 |
Neo |
pLVX-shRNA5 |
Yrbio |
表达shRNA |
mU6 |
ZsGreen1 |
Neo |
pLVX-shRNA6 |
Yrbio |
表达shRNA |
h7SK |
ZsGreen1 |
Neo |
pLVX-shRNA7 |
Yrbio |
表达shRNA |
hH1 |
ZsGreen1 |
Neo |
您可以根据需要,选用合适的穿梭载体,用来装载目的基因或者目的shRNA 。在实际使用过程中,我们发现Clontech配套的慢病毒包装质粒不是很好用,出毒效率不高,所以, 我们采用了Invitrogen公司的惺病毒包装质粒来进行配套,其包括pLPl 、pLP2 、pLP/VSVG三个质粒。将这三个质粒与Clontech的慢病毒表达载体进行混合,导入293T包装细胞,能够高效地出毒。
慢病毒包装流程:
(一)表达基因用慢病毒包装流程:
实验步骤 |
服务描述 |
服务周期 |
---|---|---|
1 |
客户选择目的基因、穿梭载体,Yrbio 负责实验设计 |
1 - 2 周 |
2 |
客户提供目的基因,或从Yrbio 基因库中购买该基因 |
1周 |
3 |
将目的基因的CDS 区构建至穿梭载体上 |
2 - 3 周 |
4 |
慢病毒包装、出毒、扩增 |
3 - 4 周 |
(二)表达shRNA 用慢病毒包装流程:
实验步骤 |
服务描述 |
服务周期 |
---|---|---|
1 |
客户选择靶基因或目的shRNA、穿梭载体, Yrbio 负责实验设计 |
1 - 2 周 |
2 |
将目的shRNA 构建至穿梭载体上 |
2 - 3 周 |
3 |
有效shRNA 筛选( 筛靶套餐,保证至少一条shRNA有效,可选) |
3 - 4 周 |
4 |
慢病毒包装、出毒、扩增 |
3 - 4 周 |
慢病毒包装价格及周期:
表达基因或shRNA |
滴度 |
价格 |
周期 |
表达基因(<2K) |
1x10^8 TU |
7000元 |
3~4周 |
2x10^8 TU |
12000元 |
3~4周 |
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
表达基因(2K~2.5K) |
1x10^8 TU |
7500元 |
3~4周 |
2x10^8 TU |
13000元 |
3~4周 |
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
表达基因(2.5K~3K) |
1x10^8 TU |
8000元 |
3~4周 |
2x10^8 TU |
15000元 |
3~4周 |
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
表达基因(>3K) |
5~7周 |
||
表达shRNA (单条) |
1x10^8 TU |
4000元 |
3~4周 |
2x10^8 TU |
7000元 |
3~4周 |
|
更高滴度 |
3~4周 |
||
表达shRNA (三条,保证至少一条有效) |
1x10^8 TU |
12000元 |
3~4周 |
更高滴度 |
3~4周 |
慢病毒对照价格及周期:
服务内容 |
滴度 |
服务价格(元) |
服务周期 |
---|---|---|---|
Lv-AcGFPl (表达基因用对照) (绿色荧光) |
lx10^8TU |
3000 |
3-4 周 |
2x10^8TU |
5000 |
3-4 周 |
|
更高滴度 |
询价 |
3-4 周 |
|
Lv--ZsGreenl (表达基因用对照) (绿色荧光) |
lx10^8TU |
2000 |
现货 |
2x10^8TU |
3500 |
现货 |
|
更高滴度 |
询价 |
3-4 周 |
|
Lv—DsRed-Monomer (表达基因用对照) (红色荧光) |
lx10^8TU |
3000 |
3-4 周 |
2x10^8TU |
5000 |
3-4 周 |
|
更高滴度 |
询价 |
3-4 周 |
|
Lv-tdTomato (表达基因用对照) (红色荧光) |
lx10^8TU |
2000 |
现货 |
2x10^8TU |
3500 |
现货 |
|
更高滴度 |
询价 |
3-4 周 |
|
Lv-NC-shRNA (表达shRNA用对照) (绿色荧光) |
lx10^8TU |
2000 |
现货 |
2x10^8TU |
3500 |
现货 |
|
更高滴度 |
询价 |
3-4 周 |
注: 由于慢病毒对照产品销售或使用频繁,有时不一定有现货,订购前请先咨询
客户须知:
详情可联络TEL:18670926326;QQ:978086785
赢润生物以“创建基因研究领袖品牌”为目标,一直致力于为广大科研工作者提供从基因、载体、细胞、启动子到shRNA、腺病毒、慢病毒、MicroRNA等基因研究所需要的生物资源及材料,从而使研究者们能够从繁琐的原材料准备和资源寻找中解放出来,将精力集中在整个研究课题中最关键最精华的部分。
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