慢病毒介导的稳定细胞株构建服务

稳定细胞株的构建可以使用质粒转染，也可使用病毒如慢病毒等进行转染。和瞬时转染不同，稳定转染就是筛选出外源DNA整合到宿主染色体的细胞，这些细胞可以长时间的表达外源目的基因。使用质粒转染后筛选稳定表达的细胞需时较长，使用病毒构建稳定细胞株能增加转染效率，缩短筛选时间。

特点：
技术平台：慢病毒
用高效的慢病毒转染方法建立稳定表达的细胞株
筛选时间短，便于挑选单克隆
可不使用药物筛选，避免药物对细胞生长的影响
带有EGFP绿色荧光，便于观察和动物模型示踪应用
原理：
慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，因此，慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的细胞株。稳定转染，就是转染的质粒DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因及蛋白。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选，或者应用高转染效率的病毒，得到可稳定表达目的基因的细胞系。

应用：
长期观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能
长期观察沉默目的基因后细胞的变化
用于后续动物实验的研究
服务流程：
表达载体的构建与验证（测序）
细胞接种：转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。
慢病毒载体质粒和包装质粒质粒共转染293T细胞；
培养48~72h，收集培养上清；
病毒感染目标细胞；
感染效率检测；
倍比稀释法筛选单克隆细胞。
客户提供：
构建好的外源基因载体（过表达）或shRNA序列（RNAi），如客户不能提供，可由我公司构建
待转染的细胞系（1×106个细胞，可传代，倍增时间小于24小时）以及细胞培养条件的说明
若需要检测靶基因的表达变化，请提供相应抗体
我们提供：
构建好的稳定表达细胞株及相关的外源基因表达分析。
 

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