分子与细胞

科研服务

基本信息
服务名称:
科研服务
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1000-100000
总点击数:
356
更新日期:
2018-09-14
服务类别:

服务详情

本平台提供的技术服务包括:SNP位点检测,菌种鉴定,载体构建,病毒包装,RNA和蛋白水平的基因表达检测:包括Q-PCR、Western Blot、ELISA,RNAassay,蛋白组学,表达谱和转录组测序等,蛋白定位检测:包括免疫荧光、免疫组化检测,蛋白相互作用包括co-IP、免疫荧光共定位检测等。本科研平台还可完成各项流式分析检测,基因敲除,基因过表达细胞株构建以及动物建模等实验。

我们以超前的市场观念,高效完美的服务,实惠的价格,一流的质量给广大的科研工作者提供各种技术服务。

protocol

细胞迁移和侵袭

划线法(迁移):

用maker笔在6孔板背后,用直尺比着,均匀的划线,大约每隔0.5-1cm一道划线,在孔中铺入细胞,摇匀后过夜培养,细胞量以第二天融合率达到90%左右。第二天用10ul枪头比着直尺垂直之前的横线划线,用PBS清洗悬浮的细胞,然后换成新鲜培养基,培养0h,4h,8h,12h后分别在相同的放大倍数下拍照。用imageJ进行迁移分析。

 

Transwall法(迁移)

向transwell下室和上室中加PBS水化1h;消化细胞后用无血清培养基清洗细胞2次,用无血清培养基重悬细胞 ;吸出transwell上室和下室中的PBS,向下室加入500ul含FBS的完全培养基,上室加入200ul细胞悬液(细胞数量约为3000-5000个),排除上室底面的气泡;37℃培养箱中孵育24h,取出transwell,用4%多聚甲醛固定细胞,进行HE或结晶紫染色,用棉球擦去上表面的细胞,在显微镜下记数下表面的细胞。

 

Transwell法(侵袭)

基质胶准备:将冻存于-80冰箱的BD matrigel 在4℃过夜,变成液态。用预冷的无血清培养基按1:5稀释matrigel,混匀。按每个Transwell上室加入100ul稀释的matrigel;放入37℃培养箱中孵育4h;接种细胞前在下室中加入500ul完全培养基;消化细胞后用无血清培养基清洗2次,用无血清培养基重悬细胞 ;向上室加入200ul细胞悬液(细胞数量约为3000-5000个),排除上室底面的气泡;37℃培养箱中孵育24h,取出transwell,用4%多聚甲醛固定细胞,进行HE或结晶紫染色,用棉球擦去上表面的细胞和matrigel胶,在显微镜下记数下表面的细胞。

 

移植瘤模型:

实验动物: 成年(4周龄)裸鼠或SCID鼠。

注射细胞量:每只鼠注射10^6-10^7细胞量,溶于100-200ul完全培养基。

注射方式:腋窝下皮下注射。

受试药物注射方式:腹腔注射或瘤体注射。瘤体大小达到100mm2左右开始给药注射,每周注射2次

瘤体测量:长径和短径测量

瘤体解剖,HE染色,免疫组化染色

 

 

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