细胞转染，稳定细胞系建立及细胞模型
服务详情
一、服务内容
1、细胞转染和稳定表达细胞株筛选
通过转染试剂或电穿孔方式等方式，将目的基因导入贴壁细胞或悬浮细胞24-48小时后，目的基因即在细胞内表达。此时为了建立稳定细胞系，可根据不同基因载体中所含的抗性标记，选用相应的药物对靶细胞进行筛选，从而得到稳定表达外源基因的细胞克隆。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。
2、针对不同种类细胞使用药物，低氧，压力等外源因素进行刺激等处理，建立相关的细胞模型，从而进行后续的研究工作。
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1干冰运输：取对数生长期的细胞，消化后低速离心1000rpm，5min收集细胞，加入适量配制好的冻存液后吹打均匀。将细胞分装入冻存管中，标明细胞的名称、细胞代次、冻存时间及操作者；放4℃冰箱30min，-20℃30min到1h，-80℃过液，然后放入液氮罐；细胞数目不少于5×106/ml；
2常温运输：细胞贴壁覆盖瓶底面积达40%以上时，装满培养液，瓶口用封口膜封好，装入盒子，盒子里用泡沫或棉花塞满，让瓶子固定在盒子中。
三、服务特点
1、针对不同细胞系筛选合适的转染试剂和质粒浓度配比，提高转染效率和蛋白表达量
2、丰富的抗生素筛选经验和单细胞克隆鉴定方法提高实验效率
3、构建的稳定表达细胞株可稳定传代，极少发生性状丢失
四、收费标准
五、客户提供材料
1、待克隆基因和载体信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如无相关shRNA序列信息，本公司可代为设计并收取相关费用）；
2、待转染细胞株（如需使用常用肿瘤细胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；
3、阳性对照样品（尽量提供）
4、相关文献（可选）
六、提交给客户结果
1、构建完成的载体和甘油菌株；
2、完整测序报告和序列碱基图
3、载体真核表达鉴定结果
4、载体真核表达蛋白
5、稳定表达细胞株>1×107
6、稳定敲低细胞株>1×107
7、完整实验报告（包括基因扩增图，细胞株过表达和敲低检测结果图等）
1、细胞转染和稳定表达细胞株筛选
通过转染试剂或电穿孔方式等方式，将目的基因导入贴壁细胞或悬浮细胞24-48小时后，目的基因即在细胞内表达。此时为了建立稳定细胞系，可根据不同基因载体中所含的抗性标记，选用相应的药物对靶细胞进行筛选，从而得到稳定表达外源基因的细胞克隆。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能（短时间即可进行观察，但效应会很快丢失）。
2、针对不同种类细胞使用药物，低氧，压力等外源因素进行刺激等处理，建立相关的细胞模型，从而进行后续的研究工作。
二、样品要求（样品处理及保存见附件）
1干冰运输：取对数生长期的细胞，消化后低速离心1000rpm，5min收集细胞，加入适量配制好的冻存液后吹打均匀。将细胞分装入冻存管中，标明细胞的名称、细胞代次、冻存时间及操作者；放4℃冰箱30min，-20℃30min到1h，-80℃过液，然后放入液氮罐；细胞数目不少于5×106/ml；
2常温运输：细胞贴壁覆盖瓶底面积达40%以上时，装满培养液，瓶口用封口膜封好，装入盒子，盒子里用泡沫或棉花塞满，让瓶子固定在盒子中。
三、服务特点
1、针对不同细胞系筛选合适的转染试剂和质粒浓度配比，提高转染效率和蛋白表达量
2、丰富的抗生素筛选经验和单细胞克隆鉴定方法提高实验效率
3、构建的稳定表达细胞株可稳定传代，极少发生性状丢失
四、收费标准
| 服务项目 | 收费标准￥ | 实验周期 |
| 蛋白瞬时表达或敲低 | ||
| 基因表达或敲低载体构建 | 请参见载体构建目录 | 2-3周 |
| 质粒大提（含去内毒素） | 700/质粒 | 1周 |
| 载体转染 | 3000/样品 | 1周 |
| Western Blot检测蛋白表达或敲低 | 2000/目的蛋白/膜 | 2周 |
| 蛋白稳定表达细胞株构建（混合克隆） | ||
| 表达载体构建 | 请参见载体构建目录 | 2-3周 |
| 质粒大提（含去内毒素） | 700/质粒 | 1周 |
| 转染和抗生素筛选 | 20000/细胞系 | 3-4周 |
| Western Blot检测稳定细胞株蛋白表达 | 2000/目的蛋白/膜 | 2周 |
| 蛋白稳定表达细胞株构建（单克隆） | ||
| 表达载体构建 | 请参见载体构建目录 | 2-3周 |
| 质粒大提（含去内毒素） | 700/质粒 | 1周 |
| 转染和抗生素筛选 | 30000/细胞系 | 6-8周 |
| Western Blot检测稳定细胞株蛋白表达 | 2000/目的蛋白/膜 | 2周 |
| 蛋白敲低细胞系构建（单克隆） | ||
| shRNA表达载体的构建 | 请参见载体构建目录 | 2-3周 |
| 质粒大提（含去内毒素） | 700/质粒 | 1周 |
| 转染和抗生素筛选 | 35000/细胞系 | 6-8周 |
| Western Blot检测敲低细胞株蛋白表达 | 2000/目的蛋白/膜 | 2周 |
| 蛋白真核表达（分泌表达） | ||
| 分泌型表达载体的构建 | 请参见载体构建目录 | 2-3周 |
| 质粒大提（含去内毒素） | 700/质粒 | 1周 |
| 细胞转染 | 3000/质粒 | 2周 |
| 蛋白表达检测（Western Blot 或 ELISA） | 2000/目的蛋白/膜；600/板 | 2周 |
| 蛋白表达和纯化 | 20000/mg | 2周 |
1、待克隆基因和载体信息，待敲低基因信息和shRNA序列信息（如无相关shRNA序列信息，本公司可代为设计并收取相关费用）；
2、待转染细胞株（如需使用常用肿瘤细胞株，如293/293T、HeLa等可由本公司提供）；
3、阳性对照样品（尽量提供）
4、相关文献（可选）
六、提交给客户结果
1、构建完成的载体和甘油菌株；
2、完整测序报告和序列碱基图
3、载体真核表达鉴定结果
4、载体真核表达蛋白
5、稳定表达细胞株>1×107
6、稳定敲低细胞株>1×107
7、完整实验报告（包括基因扩增图，细胞株过表达和敲低检测结果图等）
公司简介
易科拜德是集研发、生产、销售、客户服务为一体的生物技术公司，全力打造高品质生物试剂产品链和技术服务链。自成立之初，易科拜德就认识到产品质量是企业高速成长的生命线。为此，在每一类产品的生产过程中，逐步建立起有针对性的、标准严格的生产工艺与质控体系，确保产品的规模化生产与质量稳定。同时，根据市场的需求，不断地进行产品改进与新产品研发，紧跟现代生物学研究与应用的前进步伐！致力于每位客户的满意和成功，为客户提供最有竞争力的产品和解决方案，持续为客户创造最大价值是易科拜德一贯秉承的信念；立志成为国内有影响力的中国生物技术公司是易科拜德终极追求目标。
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