测序/合成

基因表达载体的构建方法

基本信息
服务名称：
基因表达载体的构建方法
英文名称：
Construction of gene expression vector
参考报价：
100
服务商：
济宁生物器材公司
总点击数：
605
更新日期：
2020-03-03
服务类别：
测序/合成
服务详情
    基因载体的基本条件必须包括三部分：遗传标记基因，复制区，目的基因。而质粒是小型环状DNA分子，在基因工程中作为最常用，最简单的载体。我们选用质粒作来构建基因表达载体。
   首先，选用生物材料，以模式植物拟南芥为例。
   选用拟南芥的原因：植株小，可大量种；每代时间短；结子多；生活力强（用普通培养基就可作人工培养）。
   以构建拟南芥多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因表达载体为目标，进行试验。
   首先，由基因库查询拟南芥半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的基因序列，设计目的基因的引物。
   设计引物时注意：
   1.所设计引物的长度一般是18-25bp。
   2.G与C的含量在40%-60%之间。
   3.引物自身不能有连续的三个碱基互补。两个引物之间不能有连续三个的互补或者同源碱基。
  以以上原则设计并获得引物。
  用试剂盒法提取拟南芥RNA，反转录获得其DNA，使用PCR扩增技术对目的基因进行扩增获取。获得目的基因后注意进行胶回收纯化。
   获得目的基因后，进行对质粒与目的基因的酶切。因要把目的基因与质粒链接起来，所以要产生相同的切开，使用相同的限制性内切酶。我们选用BamHI与EcorI对目的基因与质粒进行酶切。
    酶切完成后，构建连接体系，放在水浴锅中进行链接16h，一般设置水浴锅16℃左右。
    构建完成后，为检验是否构建成功，我们将构建的载体质粒转入到大肠杆菌中进行菌液PCR，检验其中是否含有拟南芥多聚半乳糖醛酸酶基因。
    实验证明本方法构建基因表达载体成功！
公司简介
      济宁生物器材公司，公司位于山东省济宁市，主要经营离心机代理销售业务，主营品牌：赛默飞。公司销售小型、台式、专用型等多类型离心机。本公司拥有最专业的售后服务人员，提供安全放心的优质售后服务。
      济宁生物器材公司是山东济宁本地离心机器材业务最全面的公司，公司业务遍及山东各地，拥有最广泛的客户受众。公司客户遍布医院、大学、研发机构各个领域行业，受到业界一致好评。
      济宁生物器材公司，您的最优选择！
      期待您的来电！
 
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