MassARRAY核酸质谱基因分型检测
MassARRAY系统检测原理
MassARRAY系统检测基因分型的核心原理是多重PCR+单碱基延伸+质谱飞行检测,最终由于不同碱基的分子质量差,导致其在质谱飞行的过程中,分子质量大的飞行速度慢,最后根据出峰的位置,判断碱基类型。
通过多重PCR,扩增出含有检测靶标的DNA序列,目前我们一个孔可以做到40重PCR反应,即在一个孔里,我们可以检测40个靶标位点。
通过iPLEX技术进行单碱基延伸,针对某一个检测靶标,由于我们的延伸引物序列是一样的,所以针对该检测靶标,只有延伸的末端目标碱基一个碱基的差异。后续我们就是根据末端目标碱基的质量差来进行基因分型的。
MassARRAY系统的检测结果会给出直接的峰图,一目了然的判定检测靶标的基因型,结果精确,稳定。如下图所示,杂合SNP由于G,T碱基的质量差,会产生两个峰,而纯合的SNP,就只有一个峰。我们根据不同碱基的质量差,来判定该峰的碱基类型。
MassARRY核酸质谱送样要求
SNP检测:样本浓度为10ng/ul, 样本体积 准备至少5 ul,
A260:280在1.8-2.0,A260:A230 2.0-2.5
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