我司提供代种服务,为做群体鉴定的客户提供种苗和初步的筛选。
一.服务内容:
1.基因编辑:
针对一个株系转基因从种到收,包含抗性筛选、转基因鉴定(混合样)、种子混合收取(1000元)。
2.超表达:
包含抗性筛选、转基因鉴定(混合样)、目的基因表达倍数分析、超表达植株种子混合收取(1500元)。
二.服务流程:
1.抗性筛选:
将客户提供的转基因种子播种到含有对应抗性的培养基中进行萌发,正常萌发的移栽到营养土里,进行后续实验。
2.转基因鉴定:
采用葆光生物公司的BGMG Fast DNA/RNA Extraction Kit (BG0049)快速提取试剂盒提取待检测植株幼嫩叶片的基因组,简略步骤如下:
- 取100mg的幼嫩植物组织样品,液氮研磨至粉末状;加入1mL裂解液(BG DNA/RNA Extraction Lysis Buffer)混匀,室温静置15min,再14000rpm离心5min,吸取100uL上清到96孔板中并加入等体积的磁珠(BGMG For RNA)富集DNA;接着用磁力架富集磁珠,去除上清,然后先用WB1清洗磁珠1次,再用WB2清洗2次,清除残留乙醇后加入50-100uL DEPC-Treated ddH2O洗脱DNA。
- 用葆光生物公司的2x Super PCR Mix(BG005M)进行PCR反应。
PCR扩增体系:
成分 |
体积 |
2x Super PCR Mix |
25μL |
前引物 |
2μL |
后引物 |
2μL |
模板 |
2μL |
ddH2O |
加到50μL |
扩增条件:
98℃ 2min
98℃ 10 s
55~60℃ 20 s } 25~35cycles
72℃ 2K/min
72℃ 5 min
12℃ ∞
三.交付内容:
1.转基因鉴定凝胶电泳结果图;
2.基因编辑提供单个株系转基因鉴定阳性苗混收种子;
3.超表达提供效率鉴定图(qPCR定量结果)和表达效率高的植株混收种子;
4.结题报告一份。