突变体筛选服务
服务详情
突变体筛选服务
为方便客户，我司在完成转基因服务后可进一步提供突变体筛选服务。首先根据目标基因sgRNA的位置，设计特异性的鉴定引物和突变检测引物，接着对生根植株进行基因组提取、PCR转基因鉴定和一代测序；最后对测序结果进行分析，确定突变类型。
服务内容及收费
服务流程
突变筛选常见问题
问题1: 为什么一株转基因中有不同的突变类型或不同部位突变类型不一致？
A.突变发生在单细胞时期，植株的每个细胞都发生了突变（突变类型可能相同，可能不同）；
B.突变发生在分化早期，植株整株呈现杂合突变；
C.突变发生在分化出来的植株的分生组织早期，植株部分呈现相同类型的突变；
D.突变发生在高度分化的细胞中，植物中仅少量细胞或者组织中存在突变；
问题2: 如果T0代混合检测到突变，一定能在T1代中筛选到突变体吗？
更多的是代表里面有突变，但并不能确定具体的突变位置，因此不能确定T1代中的突变类型；
A.携带Cas9和gRNA对基因组的编辑是随机的，不一定发生在分化的初期，如果不是初期，植株是嵌合体的可能性非常大（这也是T0代叶片明明检测是阳性，但是T1代却筛选不出来的原因）；
B.突变是可遗传的，但是植株突变区域小，含突变果实的种子较少导致没能筛选出来；
C.突变是可遗传的，植株突变区域不小，但是突变会导致种子较少，最终导致突变种子未能被筛选出来。
问题3: 花粉中检测突变与在T1代中直接检测突变的优势有哪些？
在T1代的种子中进行检测，其由合子发育而来，PCR产物测序结果可以更直观的反映突变情况，但是由于T0代中存在突变/未突变杂合的情况，由杂合子发育而来的T1代种子也会存在突变/非突变混在一起的情况。在T1代中进行筛选可能因突变/未突变杂合导致筛选样本过大，导致成本及检测难度急剧上升。如果将检测目标改为花粉检测，则可以更加直接地反馈T1代中的突变情况，并且将极大地降低筛选难度及成本。
问题4: 检测突变的方法是什么？其准确度高吗？
本服务中用的检测方法均为在gRNA两端设计前后检测引物，扩增出500bp大小的PCR产物（高保真酶扩增，实验中请勿用LA类或者改良的Taq酶，其保真比例会导致误判发生），其读数为PCR产物的混合数据，需要对gRNA部分进行对比及人工读数来进行判断，其判断出来为阳性的PCR产物反馈到检测样本中即为样本含有较大比例有突变。该方法无法判断低比例突变，但是可以通过增加检测不同的部位规避该风险。
问题5：为什么说花粉检测法能缩短获得突变体的周期？
并不是在所有的案例中都能缩短获得突变体的周期，在早期的纯合突变或者早期的杂合突变中，就不存在该优势。突变并不一定发生在植株生成的早期，在案例1和案例2中（番茄PDS基因突变，突变后色素生成受阻呈白色），突变均发生在植株生殖生长阶段，如果仅在叶片中进行检测，就会将其误判为没有突变阳性。而案例1比案例2更加能说明在不同位置检测的必要性，案例2中所有枝条的花都含有突变，而案例1中仅少量的花朵含有突变，仅有极低概率判断其为突变阳性。且从突变比例上看，即便运气很好的情况下将案例1判断为突变阳性，在T1代中也必将混入大量的非突变种子影响筛选出真正的突变阳性。
为方便客户，我司在完成转基因服务后可进一步提供突变体筛选服务。首先根据目标基因sgRNA的位置，设计特异性的鉴定引物和突变检测引物，接着对生根植株进行基因组提取、PCR转基因鉴定和一代测序；最后对测序结果进行分析，确定突变类型。
服务内容及收费
| 服务类型 | 交付类型 | 价格/元 | 备注 |
| 突变体筛选1 | 仅交付测序结果与T0代种子 | 2500 | 对6株转基因阳性苗送目标序列测序并交付测序结果，不做分析。交付标准：6株转基因苗的种子及其叶片测序结果 |
| 突变体筛选2 | T0代种子（交付至少两种突变类型） | 3500 | 从至少6株转基因阳性苗中筛选，花粉和叶片各筛选一次，筛选出叶突变植株和花粉突变花朵，对花粉突变花朵产生的种子单独收获。交付标准：至少2株突变体种子（其中如果筛选到突变体花朵种子单独采收） |
| 突变体筛选3 | T0代种子，T1代苗子（交付至少两种突变类型） | 4000 | 从至少6株转基因阳性苗中筛选，花粉和叶片各筛选一次，筛选出叶突变植株和花粉突变花朵，对花粉突变花朵产生的种子单独收获，并收获种子后在T1代苗子中筛选出突变苗子。交付标准：从至少2株筛选到的T0代种子中筛选到突变体T1代 |
| 突变体筛选收费说明： 如果转基因苗没有鉴定出突变体，我们将重新设计靶点构建载体重做一次组培（此过程半价计费），如果两次组培均不能得到突变体，仅收取第一次组培费用。 |
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服务流程
- T0代转基因苗的确定：获得携带编辑系统的转基因苗：将生根苗种植到土壤中，选取正常生长的植株，用BG0049（DNA/RNA磁珠提取试剂盒）提取其基因组DNA，用特异性引物或者通用性引物明确转基因成分纯在目的植株中；
- T0代突变苗整株突变类型确定：同一个植株不同部位的叶片筛选（3-5个不同部位叶片），分选出整株突变（不同部位均检测到相同突变信号）、局部突变（不同部位检测到不同检测信号）、未检测到突变的植株（不同部位均未检测到突变信号）；
- T0代单朵花中花粉DNA的突变类型确定：在有整株突变的植株项目中，选整株突变的植株的不同枝条的3朵花，用BG0011提取其DNA并检测突变，标记筛选出含有突变基因的花朵以便采收含突变种子；
- T1代植株中的突变类型确定：收集花粉中含有突变的花朵的种子（如果鉴定到的花朵未收到种子，则采集相同花枝中的其他果实的种子），无菌化处理后播种到组培瓶中，提取每株DNA后鉴定突变类型，将突变的苗子编号后单独移栽到组培瓶中。
突变筛选常见问题
问题1: 为什么一株转基因中有不同的突变类型或不同部位突变类型不一致？
A.突变发生在单细胞时期，植株的每个细胞都发生了突变（突变类型可能相同，可能不同）；
B.突变发生在分化早期，植株整株呈现杂合突变；
C.突变发生在分化出来的植株的分生组织早期，植株部分呈现相同类型的突变；
D.突变发生在高度分化的细胞中，植物中仅少量细胞或者组织中存在突变；
问题2: 如果T0代混合检测到突变，一定能在T1代中筛选到突变体吗？
更多的是代表里面有突变，但并不能确定具体的突变位置，因此不能确定T1代中的突变类型；
A.携带Cas9和gRNA对基因组的编辑是随机的，不一定发生在分化的初期，如果不是初期，植株是嵌合体的可能性非常大（这也是T0代叶片明明检测是阳性，但是T1代却筛选不出来的原因）；
B.突变是可遗传的，但是植株突变区域小，含突变果实的种子较少导致没能筛选出来；
C.突变是可遗传的，植株突变区域不小，但是突变会导致种子较少，最终导致突变种子未能被筛选出来。
问题3: 花粉中检测突变与在T1代中直接检测突变的优势有哪些？
在T1代的种子中进行检测，其由合子发育而来，PCR产物测序结果可以更直观的反映突变情况，但是由于T0代中存在突变/未突变杂合的情况，由杂合子发育而来的T1代种子也会存在突变/非突变混在一起的情况。在T1代中进行筛选可能因突变/未突变杂合导致筛选样本过大，导致成本及检测难度急剧上升。如果将检测目标改为花粉检测，则可以更加直接地反馈T1代中的突变情况，并且将极大地降低筛选难度及成本。
问题4: 检测突变的方法是什么？其准确度高吗？
本服务中用的检测方法均为在gRNA两端设计前后检测引物，扩增出500bp大小的PCR产物（高保真酶扩增，实验中请勿用LA类或者改良的Taq酶，其保真比例会导致误判发生），其读数为PCR产物的混合数据，需要对gRNA部分进行对比及人工读数来进行判断，其判断出来为阳性的PCR产物反馈到检测样本中即为样本含有较大比例有突变。该方法无法判断低比例突变，但是可以通过增加检测不同的部位规避该风险。
问题5：为什么说花粉检测法能缩短获得突变体的周期？
并不是在所有的案例中都能缩短获得突变体的周期，在早期的纯合突变或者早期的杂合突变中，就不存在该优势。突变并不一定发生在植株生成的早期，在案例1和案例2中（番茄PDS基因突变，突变后色素生成受阻呈白色），突变均发生在植株生殖生长阶段，如果仅在叶片中进行检测，就会将其误判为没有突变阳性。而案例1比案例2更加能说明在不同位置检测的必要性，案例2中所有枝条的花都含有突变，而案例1中仅少量的花朵含有突变，仅有极低概率判断其为突变阳性。且从突变比例上看，即便运气很好的情况下将案例1判断为突变阳性，在T1代中也必将混入大量的非突变种子影响筛选出真正的突变阳性。
公司简介
重庆葆光生物技术有限公司是一家专注实验室试剂及生命科学试剂研发、生产的公司。公司作为源头生产厂商，生产的荧光定量（染料法）、ECL发光液（飞克级）、cck-8等产品获得了市场充分认可。公司掌握核心技术，从最基础原料生产，产品具有极大价格优势，放眼全国，产品价格优势明显。
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