过表达稳转株--性能参数，报价/价格，图片

基本信息

服务名称：

过表达稳转株

英文名称：

参考报价：

6880

服务商：

广州艾迪基因科技有限责任公司

总点击数：

26

更新日期：

2025-08-05

服务类别：

分子与细胞

服务详情

▍服务优势

▍服务类型

可根据客户需求，并综合基因和细胞等情况，设计基因过表达方案。

慢病毒稳转细胞系 : 可实现大小≤5kb目的基因在细胞内的稳定表达

转座子稳转细胞系 : 可实现大小≤10kb目的基因在细胞内的稳定表达

▍服务流程

1.慢病毒稳转株构建

2.转座子稳转株构建

▍OE细胞系

▍成功案例

① 在A549细胞中过表达CopGFP

1）载体图谱

2）过表达效果

明场图片

GFP荧光图片

② 在HCT116细胞中过表达CopGFP

1）载体图谱

2）过表达效果

明场图片

GFP荧光图片

▍案例分享

一、过表达载体构建
利用同源重组的方法构建LentiCRISPRv2-GOI过表达载体，采用双酶切的方式获得线性化载体，根据同源重组设计目的片段的引物。目的片段的获得分为两步PCR方法，第一步从模板中扩增出目的片段的ORF，第二步扩增加入Gsg-3×FLAG序列。采用one step cloning试剂盒连接目的片段与线性化载体，利用Amp进行抗性筛选。
1、基因序列扩增（图1）

图1 基因序列第一轮扩增

2、基因序列扩增，添加标签及同源序列
3、双酶切pLentiCRISPRv2载体

图2 目的基因第二轮PCR及线性化载体纯化结果

4、目的基因与线性化载体连接
利用ClonExpress II one step coloning Kit连接目的片段和线性化载体。每个实验组各挑取单克隆菌落，于LB/ Amp培养基中扩增，并送样测序。
5、LentiCRISPRv2-GOI无内毒素质粒提取

二、病毒包装
1、培养细胞，配制PEI-Opti-MEM和质粒混合液，将PEI-Opti-MEM加入各质粒混合液中，轻弹管壁混匀，室温静置孵育15～20 min。
2、将上混合液小心滴加到培养基中，轻轻晃动摇匀，在培养箱中继续培养18 h。
3、18 h后小心吸去培养基，加入5 mL新配制的完全培养基。
4、42 h后收集培养上清，离心，0.45µm滤膜过滤，液氮速冻，-80℃保存。

三、细胞转染
1、配制梯度病毒稀释液
2、在六孔板中加入病毒稀释液，随后立即加入细胞，摇匀，以下每孔依次按此操作进行。细胞于培养箱中静置培养48 h。

四、阳性多克隆细胞株筛选

五、阳性单克隆细胞株筛选
1、细胞转染48 h后，更换完全培养基，随后1～2 d更换一次。
2、筛选7天后，对照组细胞全部死亡，实验组细胞扩大培养，同时进行单克隆细胞筛选。
3、96孔板每孔加100 μL细胞悬液，用封口胶将孔板封好，放于培养箱中培养
静置培养48 h后，更换完全培养基，随后1～2 d更换一次，每日观察并记录单克隆形成情况。

六、阳性单克隆细胞株验证
1、测序验证
提取单克隆细胞株基因组DNA，测序验证基因稳定转染单克隆细胞株的基因序列的准确性
2、Western blot或qPCR

▍参考文献

1.直肠癌中过表达或敲低VASN基因

Vasorin (VASN) overexpression promotes pulmonary metastasis and resistance to adjuvant chemotherapy in patients with locally advanced rectal cancer

这项研究探讨了VASN在直肠癌中的作用，发现其高表达与肺转移和化疗耐药性相关。通过建立过表达和敲低VASN的稳转株，作者进一步验证了VASN在促进癌细胞迁移、侵袭和增殖方面的作用。体内和体外实验结果显示，VASN的过表达显著增强了癌细胞的侵袭能力，并降低了对化疗药物的敏感性。实验方法包括使用慢病毒载体转染VASN基因，并通过G418抗性筛选建立稳定细胞株，使用Western blot和qPCR验证VASN过表达。

2.在小鼠中过表达LBX1基因

The alteration of LBX1 expression is associated with changes in parameters related to energy metabolism in mice

LBX1基因位于与青少年特发性脊柱侧弯易感性高度相关的单核苷酸多态性附近，被认为是这一疾病发病机制中最强的候选基因之一。研究发现，LBX1缺失不仅导致脊柱畸形，还影响瘦体重，提示LBX1在能量代谢中可能发挥作用。本研究旨在通过分析缺失LBX1的骨骼肌小鼠的表型来验证这一假设，重点关注能量代谢。结果显示，LBX1缺失的小鼠对高脂饮食诱导的肥胖表现出更强的抵抗力，尽管突变小鼠与对照小鼠的食物摄入量相当。突变小鼠的葡萄糖耐受性更好、最大有氧能力更高、核心体温更高。此外，LBX1的过表达降低了培养细胞中的葡萄糖摄取。综合数据表明，LBX1作为能量代谢的负调节因子，其缺失增加了系统性能量消耗，从而导致瘦体重。因此，本研究提示了LBX1功能障碍与青少年特发性脊柱侧弯患者瘦体重之间的潜在关联。

3.在 SW480 和 HCT116 细胞中过表达或沉默SRSF10 基因

High Expression of SRSF10 Promotes Colorectal Cancer Progression by Aberrant Alternative Splicing of RFC5

本研究旨在探讨富含丝氨酸和精氨酸的剪接因子10（SRSF10）在结直肠癌（CRC）中的作用及其发病机制。通过生物信息学分析预测CRC患者中SRSF10基因的表达情况，采用CCK8、Transwell、划痕实验和流式细胞术进行SRSF10基因敲低和过表达的功能实验，并通过琼脂糖凝胶电泳鉴定不同的SRSF10作用于RFC5前mRNA的转录本。结果显示，敲低SRSF10抑制了CRC细胞的增殖和迁移能力，促进了细胞凋亡并改变了CRC细胞的DNA复制；而SRSF10的高表达则增强了CRC细胞的增殖和迁移能力，并引起细胞周期的变化。特别是，高表达SRSF10降低了培养细胞中的葡萄糖摄取，进一步表明其在能量代谢中的负调节作用。本研究还揭示了在SRSF10敲低后，结直肠癌细胞中的RFC5基因发生了变化，SRSF10增加了RFC5外显子2-AS1(S)转录变体，从而通过AS1排除促进了RFC5外显子2的异常剪接，推动了结直肠癌的发展。研究表明，SRSF10通过生成RFC5外显子2中的异常剪接异构体促进了结直肠癌的进展，提示SRSF10可能成为CRC临床诊断和治疗的重要靶点。

公司简介

广州艾迪基因科技有限责任公司由多名留学归国博士和生物科技领域精英联合创建，坐落于广州高新技术产业示范基地——科学城。公司专注于发展和优化基于CRISPR/Cas的基因组编辑技术，依托最先进的单克隆打印平台，为用户提供高质量的技术服务和基因编辑产品。我们坚守“以客户为中心、以奋斗者为本”的原则，秉承“创新、共享”的发展理念，以达到客户对“产品质量的满意，先进技术的满意，售后服务的满意 ”为目标，确保每一位用户都能获得更卓越的体验。艾迪原则：以客户为中心以奋斗者为本艾迪理念：创新共享艾迪目标：给生命多一次机会

售后服务

联系方式

单位名称：

广州艾迪基因科技有限责任公司

详细地址：

广州市黄埔区科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器D区D501-D502号房

qq：

官网：

http://www.edgene.cn/

联系电话：

020-32238856