基因点突变载体构建
服务详情
▍基因点突变载体构建
基于CRISPR/Cas9基因编辑技术和细胞同源重组修复机制，是目前实现基因点突变最常用的策略。通过gRNA的引导，将Cas9酶引导到目标位点，并通过产生DNA双链断裂，激活细胞的修复机制，通过同源末端连接修复机制，将目标突变引入。然而，这种策略有较多缺点，如编辑效率和纯合概率低，容易导致随机的插入或缺失突变等。
▍服务详情
| 交付标准 | 1.质粒图谱 2.质粒测序结果 3.质粒操作说明 4.质粒（pegRNA+sgRNA三组），辅助质粒（混合管） |
|---|---|
| 周期 | 现货1周（查看现货），定制快至2周 |
| 价格 | 6880元起 ；具体可来电咨询18102225074 |
▍详情描述
基于先导编辑PE (Prime Editing)技术，艾迪基因全新研发的Bingo™平台。该平台具备设计高效pegRNA和Nick sgRNA的算法，可获得高效的基因点突变载体。
Prime Editing的技术原理：利用一种融合了逆转录酶的Cas9 nickase（Cas9n-RT）和一种特殊的引导RNA——pegRNA，这种RNA不仅指导编辑酶到达目标DNA序列，还携带了需要插入或替换的遗传信息。在pegRNA的指导下，Cas9n-RT在目标DNA上产生一个单链切口，然后逆转录酶使用pegRNA作为模板合成新的DNA序列，从而实现精准的单碱基替换或小片段的插入和删除，而不需要双链DNA断裂，提高了编辑的精确性和安全性。
▍服务优势
▍质粒图谱
pegRNA质粒图谱
Nick sgRNA质粒图谱
▍PE现货质粒
▍ FAQ
1、如何选择合适的载体类型？
选择载体时，应考虑实验的目的和宿主细胞的类型。例如，质粒载体常用于细菌中基因的表达或扩增，病毒载体则更适合用于哺乳动物细胞中的基因转导。除此之外，载体的启动子、复制子以及抗生素选择标记也需要根据具体需求进行选择。
2、艾迪基因载体构建的宿主菌是什么？顾客可以使用什么类型菌株来扩增质粒载体？
载体在进行扩增时，通常会使用大肠杆菌（E. coli）菌株来进行。在实验操作中，常用的大肠杆菌菌株是DH5α。DH5α适用于大多数非重组型载体。对于重组型载体，如慢病毒载体和转座子载体等，可以使用Stbl3菌株进行扩增。Stbl3是一种特殊的大肠杆菌（E. coli）菌株，来源于，HB101 E. coli strain，其基因组含有重组酶recA13突变，这可以有效地抑制长片段末端重复区的重组，从而降低错误重组的概率。
▍参考文献
1. HEK293T细胞中实现CFTR基因的点突变
Prime editing functionally corrects cystic fibrosis-causing CFTR mutations in human organoids and airway epithelial cells
囊性纤维化（Cystic Fibrosis, CF）是一种由跨膜传导调节蛋白（CFTR）双等位基因功能丧失突变引起的常见的遗传性致命疾病。过去已有多种CFTR调节剂疗法获得批准，但这些高效调节剂（HEMTs）只适用于至少有一个F508del等位基因或其他响应性CFTR突变的患者，无法为许多（超）罕见的CFTR突变患者提供治疗方法。随着科学研究发展，人们发现基因治疗能为这些突变提供了新的治疗机会。特别是最近开发的基于CRISPR的系统——prime editing（PE），为治疗遗传性疾病开辟了新的时代。Prime editing能够在患者的染色体上原位“重写”和纠正突变，提供了治疗单基因疾病如CF的新机会。
在这篇文章中，研究人员利用CRISPR-Cas9技术设计了针对CFTR基因中L227R和N1303K两种突变的prime editing策略，并在HEK293T细胞中构建了稳定表达3HA-L227R-CFTR和3HA-N1303K-CFTR的细胞模型来评估prime editing的效果。在开发的DETECTOR机器学习算法保证效率和准确率的情况下，研究人员进一步进行基因和功能校正的评估，结果显示编辑效率最高可达25%，纠正后的CFTR蛋白在糖基化、定位和离子通道功能方面得到了显著恢复。这些结果也在原代细胞模型试验中得到验证。此外，利用全基因组评估分析，研究员们并未发现显著的脱靶编辑事件，证明了prime editing的高保真度，并且该研究的临床相关性与安全性评估也得到通过。总的来说，这项研究展示了prime editing技术在纠正CFTR基因突变和恢复CFTR蛋白功能方面的潜力，为囊性纤维化的治疗提供了新的思路和方法。
公司简介
广州艾迪基因科技有限责任公司由多名留学归国博士和生物科技领域精英联合创建，坐落于广州高新技术产业示范基地——科学城。公司专注于发展和优化基于CRISPR/Cas的基因组编辑技术，依托最先进的单克隆打印平台，为用户提供高质量的技术服务和基因编辑产品。 我们坚守“以客户为中心、以奋斗者为本”的原则，秉承“创新、共享”的发展理念，以达到客户对“产品质量的满意，先进技术的满意，售后服务的满意 ”为目标，确保每一位用户都能获得更卓越的体验。 艾迪原则：以客户为中心 以奋斗者为本 艾迪理念：创新 共享 艾迪目标：给生命多一次机会
售后服务
联系方式
| 单位名称： |
|
详细地址：
广州市黄埔区科学城掬泉路3号广州国际企业孵化器D区D501-D502号房
|
|
qq：
|
| 官网： |
|
联系电话：
020-32238856
|
| Email： |
