分子与细胞

基因敲入载体构建

基本信息
服务名称:
基因敲入载体构建
英文名称:
参考报价:
6880
总点击数:
15
更新日期:
2025-08-05
服务类别:

服务详情
 CRISPR基因敲入载体构建
基因定点敲入(KI,gene knock in)是指外源DNA片段插入到指定的基因组位置,使该片段行使相应的功能。可以赋予细胞或生物体新的功能或恢复缺陷基因的正常功能,可用于研究基因功能与调控机制、构建疾病模型或开展基因治疗。

 

 服务详情
服务类型 荧光蛋白定点敲入载体/标签蛋白定点敲入载体/特定DNA片段敲入的载体
交付标准 1.质粒图谱
2.质粒测序结果
3.质粒扩增操作说明
4.质粒(sgRNA-Cas9编辑质粒、Donor质粒)
周期 快至2周 
价格 6880元起 ;具体可来电咨询18102225074

 

 详情描述
艾迪基因创新研发的高效基因敲入技术,采用了升级的CRISPR/Cas9系统,通过积攒十几年的基因编辑经验,总结出最合适gRNA和Donor载体设计策略,具有更高的阳性率和更广的敲入位点选择性。可根据客户需求提供基因敲入载体构建服务。
 
 服务优势
 
 服务类型
可根据客户需求,综合基因等情况,进行基因敲入载体的设计与构建。
荧光蛋白定点敲入载体 EFGP、Luc、mCherry等
标签蛋白定点敲入载体 Flag、HA、Myc、HiBiT等
特定DNA片段敲入目标基因组位置的载体 /
特定DNA片段敲入基因组安全位点的载体 /
 
 质粒图谱
pCRISPR Donor质粒图谱
 
pSpCas9质粒图谱
 
 FAQ
1、如何选择合适的载体类型?
选择载体时,应考虑实验的目的和宿主细胞的类型。例如,质粒载体常用于细菌中基因的表达或扩增,病毒载体则更适合用于哺乳动物细胞中的基因转导。除此之外,载体的启动子、复制子以及抗生素选择标记也需要根据具体需求进行选择。
 
2、艾迪基因载体构建的宿主菌是什么?顾客可以使用什么类型菌株来扩增质粒载体?
载体在进行扩增时,通常会使用大肠杆菌(E. coli)菌株来进行。在实验操作中,常用的大肠杆菌菌株是DH5α。DH5α适用于大多数非重组型载体。对于重组型载体,如慢病毒载体和转座子载体等,可以使用Stbl3菌株进行扩增。Stbl3是一种特殊的大肠杆菌(E. coli)菌株,来源于,HB101 E. coli strain,其基因组含有重组酶recA13突变,这可以有效地抑制长片段末端重复区的重组,从而降低错误重组的概率。
 
 参考文献
1.在C57BL/6 J小鼠的Ins2启动子下游插入tdTomato
CRISPR/Cas9-mediated knockin of IRES-tdTomato at Ins2 locus reveals no RFP-positive cells in mouse islets
使用CRISPR/Cas9基因编辑技术,研究者构建了一种转基因小鼠模型,使其在胰腺β细胞中表达特定的荧光蛋白。在C57BL/6 J小鼠中,将tdTomato外源基因插入到Ins2启动子的下游。研究者设计了针对CRISPR/Cas9系统的Ins2特异性单导RNA靶向外显子2,同时构建了供体载体。然后,将Cas9、单导RNA和供体载体在体外显微注射到小鼠受精卵中,并将这些受精卵植入假孕小鼠体内。通过杂合子交配获得纯合子,并通过基因型鉴定、体内成像和冰冻切片验证了敲入效果。获得了六只F0小鼠和稳定遗传的Ins2-IRES-tdTomato F1。基因组测序结果显示,与对照组相比,敲入组的Ins2外显子没有变化,只有tdTomato的碱基序列被添加,没有发生碱基突变。然而,在体内成像和冰冻切片中未观察到红色荧光蛋白(RFP)的表达,敲入基因tdTomato的蛋白表达为阴性。结果表明,tdTomato蛋白的表达和荧光强度较低,未达到检测阈值。在CRISPR/Cas9技术中,IRES连接的外源片段会影响前基因的转录水平,从而导致下游基因的低水平表达,并影响基因插入的效果。
公司简介
广州艾迪基因科技有限责任公司由多名留学归国博士和生物科技领域精英联合创建,坐落于广州高新技术产业示范基地——科学城。公司专注于发展和优化基于CRISPR/Cas的基因组编辑技术,依托最先进的单克隆打印平台,为用户提供高质量的技术服务和基因编辑产品。  我们坚守“以客户为中心、以奋斗者为本”的原则,秉承“创新、共享”的发展理念,以达到客户对“产品质量的满意,先进技术的满意,售后服务的满意 ”为目标,确保每一位用户都能获得更卓越的体验。 艾迪原则:以客户为中心  以奋斗者为本 艾迪理念:创新 共享 艾迪目标:给生命多一次机会

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