划痕实验目的

划痕实验(Wound Healing Assay)，也被称为细胞迁移试验或划痕试验，是一种用于评估细胞迁移能力的体外实验方法。它模拟了细胞在组织损伤后迁移到损伤区域进行修复的过程，通过此实验可以研究细胞的移动和修复能力，以及细胞间的相互作用。此外，划痕实验还用于药物筛选、疾病模型建立、基因功能研究等。

划痕实验原理

划痕实验的基本原理是在细胞单层上人为制造一个空白区域(称为“划痕”或“伤口”)，划痕边缘的细胞会逐渐向空白区域迁移，使“划痕”愈合。这个过程涉及到细胞的粘附、收缩、增殖和信号传递等多个步骤。通过测量不同时间点的划痕间距并计算差值，可以对细胞的迁移能力做出判断。

划痕实验仪器与试剂

仪器：

细胞培养板或皿、显微镜(最好是延时显微镜)、照相设备(如相机或图像采集系统)、计时器、移液枪、移液管、细胞计数仪(可选)、CO2培养箱、台式离心机(可选)、酶标仪(可选)

试剂：

细胞适配培养基、磷酸盐缓冲液(PBS)、胰酶、无血清培养基、FBS(胎牛血清，可选)、待测样本(如药物、基因表达载体等)

划痕实验步骤

1.准备细胞：在实验前一天，将细胞接种在培养板或皿中，并确保细胞处于对数生长期。

2.划痕：当细胞达到适当的密度时(通常是80%-90%的覆盖率)，使用无菌的划痕工具(如200μl枪头或细胞刮刀)在培养表面制造划痕。确保划痕清晰、整齐，间距适中。

3.洗涤：用PBS轻轻冲洗细胞，去除死细胞和杂质。

4.更换培养基：将普通细胞培养基更换为无血清培养基，以抑制细胞增殖并促进迁移。

5.开始计时：在显微镜下观察并记录划痕开始时的状态。每隔一定时间(如6、12、24小时)对划痕进行拍照。

6.数据分析：通过测量划痕宽度随时间的变化，计算细胞的迁移速度。可使用软件(如Image J)分析图像，计算细胞间距离的均值或划痕面积均值。

7.实验重复：为了获得可靠的结果，至少进行三次重复实验。

划痕实验应用

划痕实验广泛应用于以下几个方面：

1.评估细胞迁移能力

2.研究细胞间相互作用

3.药物筛选

4.疾病模型建立

5.基因功能研究

【隆科生物合作项目】

1.病理检测：石蜡包埋、切片、HE染色、masson染色、番红固绿染色、天狼星红染色、免疫组化、免疫荧光单标/双标/多标、全景扫描、激光共聚焦拍照等。

2.分子生物学实验：荧光定量PCR检测、Western blot检测、血常规、生化酶活、ELISA检测等。

3.细胞实验：耐药细胞株构建、细胞毒性实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞流式周期检测、细胞流式凋亡检测等。

4.动物实验：动物模型构建、动物饲养服务、动物临床前研究、药效评价、功能性评价、动物影像学、动物行为学实验等。

5.微生物学实验：抑菌试验、药敏试验、菌种鉴定、微生物多态性分析等实验。