WB实验目的

WB实验，即Western Blot(蛋白免疫印迹)，是一种将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物(如NC膜或PVDF膜)上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的蛋白质检测技术。其主要目的包括：

研究蛋白质表达：检测目的蛋白是否存在，以及在不同样品或处理条件下的表达情况(上调或下调)。

蛋白质定性或粗定量：通过条带的出现与否及条带的粗细，对蛋白质进行定性或粗定量分析。

疾病早期诊断：在医学领域，WB实验可用于疾病的早期诊断，通过检测特定蛋白质的表达水平来辅助诊断。

WB实验原理

WB实验的基本原理是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)将蛋白质样品进行分离，然后通过电场作用将蛋白质转移到固相支持物上。在固相支持物上，蛋白质以非共价键形式吸附并保持其电泳分离的多肽类型及生物学活性不变。随后，利用特异性抗体与目的蛋白结合，再通过酶或同位素标记的第二抗体进行显色或放射自显影，从而检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

WB实验仪器与试剂

仪器

电泳仪、转膜装置、离心机、恒温摇床、紫外分光光度计、凝胶成像系统

试剂

裂解液、PMSF(蛋白酶抑制剂)、SDS-PAGE凝胶配制试剂(如丙烯酰胺、Tris、SDS等)、电泳缓冲液、转膜缓冲液、封闭液(如5%脱脂奶粉)、一抗、二抗(带有酶或同位素标记)、显色底物(如ECL发光液)

WB实验步骤

1.蛋白提取：使用适当的裂解液提取细胞或组织中的总蛋白。

2.蛋白定量：采用Bradford法或BCA法等测定蛋白浓度。

3.SDS-PAGE电泳：配制分离胶和浓缩胶，上样进行电泳以分离蛋白质。

4.转膜：将电泳后的蛋白质从凝胶转移到PVDF或NC膜上。

5.封闭：用封闭液封闭膜以减少非特异性结合。

6.一抗孵育：加入特异性一抗，室温或4℃孵育。

7.洗涤：用洗涤液多次洗涤膜以去除未结合的一抗。

8.二抗孵育：加入带有酶或同位素标记的二抗，孵育后洗涤。

9.显色：使用化学发光试剂进行显色，并通过凝胶成像系统曝光和成像。

WB实验应用

1.生物研究：用于蛋白质组学、基因组学和细胞生物学等领域，检测蛋白质的表达和修饰，以及蛋白质之间的相互作用。

2.医学研究：在疾病机制研究和药物研发中发挥作用，帮助了解疾病发生和发展过程中蛋白质的表达和修饰变化，以及药物的作用机制和药效。

3.化学研究：用于小分子化合物的筛选和鉴定，检测小分子化合物对蛋白质表达和修饰的影响。

【隆科生物合作项目】

1.病理检测：石蜡包埋、切片、HE染色、masson染色、番红固绿染色、天狼星红染色、免疫组化、免疫荧光单标/双标/多标、全景扫描、激光共聚焦拍照等。

2.分子生物学实验：荧光定量PCR检测、Western blot检测、血常规、生化酶活、ELISA检测等。

3.细胞实验：耐药细胞株构建、细胞毒性实验、细胞迁移实验、细胞侵袭实验、细胞流式周期检测、细胞流式凋亡检测等。

4.动物实验：动物模型构建、动物饲养服务、动物临床前研究、药效评价、功能性评价、动物影像学、动物行为学实验等。

5.微生物学实验：抑菌试验、药敏试验、菌种鉴定、微生物多态性分析等实验。