流感疫苗生产的纯化过程和设备
2009-01-04 来源:本站 点击次数:3893流感疫苗生产的纯化过程和设备
流感疫苗生产的纯化过程：
1. 已培养好的带病毒的鸡胚用75％酒精消毒；
2. 收集鸡胚尿囊液：根据鸡蛋大小收集量略有不同（每只6－10ml）；
3. 尿囊液初滤JST型10μm滤芯过滤；
4. 连续流离心机或超滤系统过滤
a. 连续流离心机：日立R13C，用12,000rpm，流量：每分钟600－800ml，除去杂质，上清液用于透析浓缩；
b. Millipore超滤系统，0.45μm滤膜，除去杂质
5. 尿囊液的透析浓缩：用Millipore超滤器，1000KD膜包浓缩，浓缩后通常为尿囊液量的1/30；
6. 超速离心的病毒纯化（略）；
7. 福尔马林脱毒；
8. 乙醚裂解；
9. 100KD透析脱糖；
10. 去福尔马林；
11. 去乙醚……
12. 几种流行病毒抗原的混合（如H1N1+H3N2+H2N2）和稀释
13. 加入稳定剂
14. 成品
离心纯化需要准备的仪器和基本材料：
1. 仪器
a. 阿贝折射仪 Abbe refractometer （测蔗糖浓度）
b. Cole parmer 软管泵：KH-77913-25
c. 紫外分光光度计或核酸蛋白分析仪（有280nm，260nm波长的），可以是带流动池及记 录仪，也可以是带标准样品池的）
2. 梯度液
a. PB缓冲液PH7.3
b. 30％ w/w蔗糖液（Sucrose，Sigma，AR级）
c. 55％ w/w蔗糖液
d. 58％ w/w蔗糖液
3. 实验器具
a. 50ml有刻度玻璃管 100支
b. 500ml有刻度烧杯 5支
c. 100ml有刻度烧杯 5支
d. 1000ml有刻度量筒 3只
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