石蜡切片组织细胞色素C 免疫荧光检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI 石蜡切片组织细胞色素 C 免疫荧光检测试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡方法和抗细

胞色素C 单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗的应用，在线粒体特异性荧光染料的帮助下，通过荧光显微

镜分析存档中的石蜡包埋的组织切片中细胞区室（线粒体和细胞浆）的细胞色素C 的分布状态，从而观察

分析细胞凋亡的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于

各种动物和人体组织石蜡包埋切片的细胞色素C 分析。广泛用于细胞生物学的研究。产品严格无菌，即到

即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

细胞色素C（CYTOCHROME C）在细胞凋亡中扮演着重要作用。细胞色素C 位于线粒体内外膜之间。当

细胞凋亡时，它从线粒体内释放到细胞浆里，引起一系列的信号通道的下游反应。通常使用免疫组化方法，

即通过不同波长的荧光染料的重叠染色，检测其分布，反映细胞凋亡和细胞通路等。

产品内容

YIJI 去石蜡液（Reagent A） 毫升

YIJI 补水液A（Reagent B） 毫升

YIJI 补水液B（Reagent C） 毫升

YIJI 补水液C（Reagent D） 毫升

YIJI 补水液D（Reagent E） 毫升

YIJI 清理液（Reagent F） 毫升

YIJI 修复液（Reagent G） 毫升

YIJI 封阻液（Reagent H） 毫升

YIJI 抗体液（Reagent I） 毫升

YIJI 染色液（Reagent J） 毫升

YIJI 重染液（Reagent K） 微升

YIJI 抗淬灭液（Reagent L） 微升

YIJI 强化液（Reagent M） 毫升

产品说明书 1 份

保存方式

保存YIJI 修复液（Reagent G）、YIJI 封阻液（Reagent H）、YIJI 抗体液（Reagent I）、YIJI

染色液（Reagent J）、YIJI 重染液（Reagent K）和YIJI 抗淬灭液（Reagent L）在－20℃冰箱里，

其余的保存在 4℃冰箱里；YIJI 抗体液（Reagent I）和YIJI 染色液（Reagent J）严禁反复冻融；

YIJI 染色液（Reagent J）、YIJI 复染液（Reagent K）和YIJI 抗淬灭液（Reagent L）避免光

照；有效保证 6 月

1

用户自备

1.5毫升离心管：用于配制重染工作液的容器

盖玻片：用于封片孵育

小型染色缸：用于去石蜡的操作

烘箱：用于去石蜡处理

（共聚焦）荧光显微镜：用于组织细胞荧光观察

实验步骤

一、 去石蜡处理

1． 取出 10 片待测的 10 微米厚的石蜡包埋的组织切片

2． 放进 80℃烘箱，孵育 30 分钟

3． 室温下静置 15 分钟

4． 按下表依次放进小染色缸里孵育

染色缸 孵育时间

毫升YIJI 去石蜡液（Reagent A） 分钟

毫升YIJI 去石蜡液（Reagent A） 分钟

毫升YIJI 去石蜡液（Reagent A） 分钟

毫升YIJI 补水液A（Reagent B） 分钟

毫升YIJI 补水液B（Reagent C） 分钟

毫升YIJI 补水液C（Reagent D） 分钟

毫升YIJI 补水液D（Reagent E） 分钟

5． 小心移去切片上的YIJI 补水液D（Reagent E）

6． 小心加上 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面

7． 室温下孵育5 分钟

8． 小心移去切片上的YIJI 清理液（Reagent F）

二、样品预处理

实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：

9． （选择步骤）将切片置于100 毫升烧杯，加入 毫升YIJI 强化液（Reagent M）

10．（选择步骤）放进微波炉里加热5 分钟：其中15 秒煮沸后，间隙15 秒后再煮沸，直至5 分钟

11．（选择步骤）室温下，冷却20 分钟

12．加入 微升YIJI 修复液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面

2

13．室温下孵育 5 分钟

14．小心抽去YIJI 修复液（Reagent G）

15．空气中晾干

16．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面

17．室温下孵育5 分钟

18．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

19．加入 微升YIJI 封阻液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面

20．室温下孵育60 分钟

21．小心抽去YIJI 封阻液（Reagent H）

三、 样品染色处理

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的YIJI 重染液（Reagent K）置入冰槽里融化，然后分别移

出 微升YIJI 清理液（Reagent F）和 微升YIJI 重染液（Reagent K）到新的

1.5 毫升离心管，标记为YIJI 重染工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

22．加入 微升YIJI 抗体液（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面

23．盖上盖玻片，室温下孵育2 至16 小时（注意：避免气泡；参见注意事项 8）

24．小心移去盖玻片，抽去YIJI 抗体液（Reagent I）

25．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面

26．室温下孵育5 分钟

27．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

28．重复实验步25 至27 二次

29．加入 微升YIJI 染色液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面

30．室温下孵育 30 分钟，避免光照（注意：避免气泡）

31．小心抽去YIJI 染色液（Reagent J）

32．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面

33．室温下孵育5 分钟

34．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

35．重复实验步32 至34 二次

36．加入 微升YIJI 重染工作液在切片上，铺满整个切片样品表面

37．室温下孵育20 分钟，避免光照

38．小心抽去YIJI 复染工作液

39．加入 微升YIJI 清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面

40．室温下孵育5 分钟

41．小心抽去YIJI 清理液（Reagent F）

42．重复实验步39 至41 二次

43．加入 微升YIJI 抗淬灭液（Reagent L）

44．盖上盖玻片或封片

45．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察

荧光染料 异硫氰酸荧光素（FITC） MitoTracker RED ――

荧光颜色 绿色 红色 桔黄色

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