质粒转染试剂使用说明书
2018-06-25 来源:本站 点击次数:6548一、性能参数
产品名称：Transfection Reagent 简称“TR” 产品货号： FH880806
浓度：1μg/μl 推荐使用浓度：1μg-10μg/ml
规格：50μl （赠送） 保存条件：2-8℃ ，切勿放-20℃
有效期至： 18个月 运输条件：常温运输
使用范围：仅限科研使用，不能应用于临床。
二、产品详细描述
1、产品说明
TR（质粒转染试剂）是一种多聚阳离子聚合物，具有较高的阳离子电荷密度使得聚合物网络在任何 pH 下都能充当有效的“质子海绵”(proton sponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞，其效果好于脂质聚酰胺，经进一步的改性后，其转染性能好于树枝状聚合物，而且它的细胞毒性低。
2、主要特点
· 高效转染各种贴壁细胞。
· 对悬浮细胞有很高的转染效率。
· 在同类产品中具有较高的转染效率和较低的毒性。
· 有无血清存在(0-20％)对转染试剂的效果无影响。
· 可用于单个质粒或多个质粒共转。
· 转染24-72小时后，有高的蛋白表达量。
3、注意事项
推荐在混合前使用Opti-MEM （Cat. No. 267485)或DMEM细胞培养基(Cat. No. SH30022.01B)稀释TR和核酸。
· 转染过程中勿向培养基中添加抗生素，以免造成细胞死亡。
· 不同批次实验请保持细胞接种条件相同。
· 转染前细胞的状态好坏对最终的转染效果高低影响很大，请务必保证转染前，细胞处于良好的生长状态。
三、质粒转染步骤
所列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，其他培养材料，请参考表1按照转染规模调整，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(μg)与TR(μg)的比值为1:3或1:4，转染状态良好的细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。
1、贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500μl培养基中，在转染时细胞可长至90-95%融合。
悬浮细胞：在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500μl培养基中。
2、转染液制备，每孔细胞用量如下：
A. 用50μlDMEM培养基（或者其他无血清培养基）稀释质粒DNA，轻轻混匀。
B. 取适量TR在50μl DMEM培养基中稀释，室温孵育5min。
C. 将前两步所稀释的DNA和TR 混合，轻轻混匀，室温放置30min。
3、在每孔细胞中加入混合后的转染液，轻轻摇匀。
4、贴壁细胞可在转染4-6h后可更换培养基，悬浮细胞可在转染后的18-48h之间，对细胞进行换液。转染18-48h之后可检测基因表达。如果检测到蛋白表达，请在转染后24-72h收集培养液。
5、对于稳定转染，在转染24h后以1:10传代培养，第二天可加入选择培养基。
表1 各种细胞培养板转染推荐用量
|
培养皿/板 |
表面积(cm2) |
种板密度 |
培养液 |
混合液 |
质粒 |
TR |
|
10cm |
60 |
2-3×106cell/dish |
10 ml |
2×500μl |
10μg |
30-40 μl |
|
60mm |
20 |
8-10×105cell/dish |
3 ml |
2×150μl |
3μg |
9-12 μl |
|
6孔 |
10 |
2-3×105cell/well |
2 ml |
2×100μl |
2.5μg |
7.5-10 μl |
|
12孔 |
4 |
1-3×105cell/well |
1 ml |
2×50μl |
1μg |
3-4 μl |
|
24孔 |
2 |
0.5-2×105cell/well |
0.5 ml |
2×25μl |
0.5μg |
1.5-2 μl |
|
96孔 |
0.3 |
1000-100000cell/well |
0.1 ml |
2×5μl |
0.1μg |
0.3-0.4 μl |
下图为我司TR试剂与其他转染试剂在不同细胞中的对比图
左图为我司TR转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HEK293细胞时的对比实验，实验结果表明，我司TR的转染效率要明显超过品牌试剂转染效率；
右图为我司TR转染试剂与市面常用的知名品牌转染试剂在转染HepG2细胞时的对比实验，实验结果表明，我司TR的转染效率要明显超过品牌试剂的转染效率。
