HSP10,鱼热休克蛋白10ELISA试剂盒的检测范围及操作方法

•  检测范围：3.125 ng/ml – 100 ng/ml。
•  灵敏度：最低检测浓度小于0.1 ng/ml。
•  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
•  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。

操作步骤

1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.   样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被鱼10kDa热休克蛋白1（HSP10）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的鱼10kDa热休克蛋白1（HSP10）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
说明
由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

• 最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。
• 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。
• 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。
• 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
• 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
• 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。
• 某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。

ELISA试剂盒常见问题：
1.一个96T试剂盒能做多少个样本?
 
每次实验需要做6个标准孔和1个空白对照,所以最终可以检测89个样本,如果样本做复孔,则等于样本翻倍.
 
2.一次实验需要多少时间?
 
ELISA试剂盒大部分采用双抗夹心法检测,预计时间是2-2.5小时,竞争法时间则为1.5-2小时.
 
3.产品稳定性如何?
 
经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。为减小外部因素对
试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
 
4.样本需要分批次检测,试剂盒是否可以只做一次标准曲线?
 
虽然试剂盒操作原理都一样,但是每次实验的参数都会受到影响,比如时间,温度等,所以为了得到更为准确的数据,建议每次实验时重新制作标准曲线.
 
5.样本较多是否可以减少标准孔?
 
为了确保曲线的稳定,不建议减少标准孔,请尽量确保6个标准孔和1个空白对照.
 
6.试剂盒一次性用不完,下次还可以用吗?
 
ELISA试剂盒的酶标条可以拆卸,用不完的试剂按照说明书要求的保存条件储存起来,在有效期内,可以下次在使用.
 
7.组织样本经过福尔马林浸泡后,还能做ELISA实验吗?
 
不可以,这类样本只能制作病理切片,可以做免疫组化或者WB等试验。
 
8.检测一个指标,需要准备多少血清?
 
我公司的ELISA试剂盒,要求检测样本是离心后50ul直接检测,所以客户需要准备离心后的血清在50-100ul之间,原则上就是确保50ul的上样量,如果是多个指标,样本以此类推.
 
9.对于组织样本需要提供多少呢?
 
组织样本按照鲜重100mg以上即可,不可风干或者灭菌等处理.
 
10.ELISA试剂盒检测需要什么仪器?
 
全自动酶标仪,采用450nm波长,检测OD值.
 
11.血浆样本的时候可以选择哪些抗凝剂？
 
通常选用的抗凝剂有EDTA、肝素、柠檬酸钠.
 
12.保存一段时间的血清样本发现变红什么原因?
 
血清变红色,通常是”溶血”现象导致的,其原因首先考虑血清是否收到污染,其次溶血是因为红细胞破碎,所以考虑在离心的时候不彻底,导致在保存过程中变红的现象.此时的样本若是浅红色,建议再次离心到透明状态,如果是深红色,不建议用于ELISA实验.
 
13.之前用剩余的盒子是否可以跟新批次的试剂盒混用?
 
不建议混用,不同批次的试剂盒之间存在一定的皮内差,混用会导致差异化增大,所以先把剩余的盒子用完,再做新批次.
 
14.不同试剂盒里面的洗涤液可以混用吗?
 
洗涤液成分是一种弱酸,不同盒子里面的洗涤液都是一样的,可以混用.
 
15.标准曲线做出来有一个点偏离曲线是什么原因?
 
曲线上面的某个点不在曲线上,这种现象叫做跳孔,通常是由系统误差造成的,建议在试剂盒使用前充分平衡试剂盒,然后标准品要充分摇匀后,再做一次曲线.
 
 
16.你们公司试剂盒如何保证质量?
 
① 高效、灵敏、特异性强的抗体。
 
② 吸附性能好、空白值低、孔底透明度高的固相载体。
 
③ 批内差与批间差分别小于9%和11%，假阳性率控制在3%；线性R值在0.99以上。