生物学ELISA方法在黄曲霉毒素检测中的应用
2021-08-07 来源:本站 点击次数:3046
新版 2020 药典扩大了成熟检测技术在药品质量控制中的推广和应用，如新增聚合酶链式反应（PCR）法、DNA测序技术指导原则等，推进分子生物学检测技术在中药饮片、动物组织来源材料、生物制品起始材料、微生物污染溯源鉴定中的应用。可见生物学检测技术在越来越多的领域都将大有可为，未来可期。
某些中药在种植、储存等过程中易产生一些真菌毒素，如黄曲霉毒素等，对人体具有毒性，有必要加强相关真菌毒素的控制。中药品种的原材料大多源于自然环境下生长的植物、动物或矿物，其存在有害残留物质或污染物质的概率较髙。而黄曲霉毒素是由真菌黄曲霉和寄生曲霉产生的一类代谢产物，广泛存在于自然界中。
由于各类真菌毒素的发生毒性的机理不同，容易受污染的对象也有所不同。因此，应选取容易受污染的中药品种进行相应毒素检测方法的开发。粮稃类、种子类、油性成分多的品种应注意黄曲霉毒素的检测；处方中含有易污染的药材以及生粉投料的中成药品种应注意相关真菌毒素的检测。
2015 版药典推荐的黄曲霉毒素检测方法是高效液相色谱或高效液相色谱-质谱（HPLC MS）联用，2020 版药典新增了酶联免疫法（ELISA）的生物学检测方法。相较于传统的高效液相色谱或高效液相色谱-质谱（HPLC MS）联用方法，酶联免疫法（ELISA）在仪器成本、检测成本、检测时间及样品前处理上都具有相当大的优势，普通检测人员可操作性高，且 ELISA 具有跟传统方法相当的检测灵敏度。
IKA推荐
ELISA 检测黄曲霉毒素的实验步骤
01
供试品粉末2g（50mL离心管）
加20ml甲醇，振荡5min
02
涡动30s后
加san氯甲烷再次振荡2min
03
微孔板抗体包被
加酶标抗原混匀、孵育（25°C 45min）
或底物显色反应（25°C 15min）
*备注：摇床/高低温混匀器需根据反应容器规格选配夹具
关于IKA
IKA是工业和科研领域世界知名的实验室仪器设备, 分析仪器设备和加工技术制造商之一。总部位于德国施陶芬, IKA的产品和技术服务于超过160个国家的客户。公司拥有超过900多名员工, 致力于为客户提供优异的技术, 帮助客户获得成功。同时，IKA还与世界知名大学和科学家进行着密切的合作, 支持其在科研道路上不断探索。除了位于德国的总公司, IKA现在在美国, 中国, 马来西亚, 日本, 印度, 巴西, 韩国, 越南, 英国和波兰均设有独立运营的全资子公司。
——部分文案节选自《中国药典2020年版》
某些中药在种植、储存等过程中易产生一些真菌毒素，如黄曲霉毒素等，对人体具有毒性，有必要加强相关真菌毒素的控制。中药品种的原材料大多源于自然环境下生长的植物、动物或矿物，其存在有害残留物质或污染物质的概率较髙。而黄曲霉毒素是由真菌黄曲霉和寄生曲霉产生的一类代谢产物，广泛存在于自然界中。
由于各类真菌毒素的发生毒性的机理不同，容易受污染的对象也有所不同。因此，应选取容易受污染的中药品种进行相应毒素检测方法的开发。粮稃类、种子类、油性成分多的品种应注意黄曲霉毒素的检测；处方中含有易污染的药材以及生粉投料的中成药品种应注意相关真菌毒素的检测。
2015 版药典推荐的黄曲霉毒素检测方法是高效液相色谱或高效液相色谱-质谱（HPLC MS）联用，2020 版药典新增了酶联免疫法（ELISA）的生物学检测方法。相较于传统的高效液相色谱或高效液相色谱-质谱（HPLC MS）联用方法，酶联免疫法（ELISA）在仪器成本、检测成本、检测时间及样品前处理上都具有相当大的优势，普通检测人员可操作性高，且 ELISA 具有跟传统方法相当的检测灵敏度。
IKA推荐
ELISA 检测黄曲霉毒素的实验步骤
01
供试品粉末2g（50mL离心管）
加20ml甲醇，振荡5min
| Tube Mill control 试管研磨机 |
 |
| IKA PETTE 移液器 |
 |
| KS 260 basic / control 圆周振荡摇床 |
 |
涡动30s后
加san氯甲烷再次振荡2min
| VXR BASIC 小型振荡器 |
 |
微孔板抗体包被
加酶标抗原混匀、孵育（25°C 45min）
或底物显色反应（25°C 15min）
| MTS 2/4 DIGITAL 酶标板震荡器 |
 |
| Matrix Orbital Delta Plus 高低温混匀器 |
 |
*备注：摇床/高低温混匀器需根据反应容器规格选配夹具
关于IKA
IKA是工业和科研领域世界知名的实验室仪器设备, 分析仪器设备和加工技术制造商之一。总部位于德国施陶芬, IKA的产品和技术服务于超过160个国家的客户。公司拥有超过900多名员工, 致力于为客户提供优异的技术, 帮助客户获得成功。同时，IKA还与世界知名大学和科学家进行着密切的合作, 支持其在科研道路上不断探索。除了位于德国的总公司, IKA现在在美国, 中国, 马来西亚, 日本, 印度, 巴西, 韩国, 越南, 英国和波兰均设有独立运营的全资子公司。
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