Fetuin A胎球蛋白A对人预脂肪细胞株分化的影响及作用机制
2023-05-15 来源:本站 点击次数:829实验材料:
1. 人预脂肪细胞株3T3-L1
2. 重组人源Fetuin A蛋白
3. 细胞培养基DMEM及补充物
4. 实时荧光定量PCR相关试剂
5. Western blot相关试剂
6. 甘油三酯(TG)测定盒
7. 细胞因子检测试剂盒
8. 特异性通路抑制剂
9. 其他常规细胞实验试剂
实验方法:
1. 3T3-L1细胞培养至70-80%融合,改用分化培养基,加入Fetuin A(50、200ng/ml)或同质体;
2. 分化第1、3、5天,收集细胞检测PPARγ和C/EBPα的mRNA及蛋白表达(PCR及Western blot);
3. 分化第7天,检测细胞内TG含量及分泌的TNFα、IL-1β和IL-6;
4. 采用特异性抑制剂阻断MAPK/PI3K通路,观察Fetuin A的作用;
5. 采用siRNA敲低CSF-1R,检测Fetuin A的作用。
实验结果:
1. Fetuin A上调PPARγ和C/EBPα的表达,增加TG积累,促进3T3-L1细胞分化;
2. Fetuin A上调TNFα、IL-1β和IL-6的分泌;
3. MAPK/PI3K通路抑制剂可逆转Fetuin A的上述作用;
4. 敲低CSF-1R也可减弱Fetuin A对3T3-L1细胞分化的促进作用。实验结论:
Fetuin A可通过激活MAPK/PI3K通路、上调PPARγ和C/EBPα的表达、调控细胞因子的分泌等机制促进3T3-L1细胞的分化。这些效应可能涉及Fetuin A与CSF-1R的相互作用。本研究有助于揭示Fetuin A参与脂肪代谢调控的分子机理,为开发治疗代谢性疾病的新策略提供理论依据。
产品：Y07501 重组人胎球蛋白A Recombinant human Fetuin A
内毒素：小于5EU/mg.
纯度：SDS-PAGE检测，纯度大于95.0%。
规格：50ug/1g（工业客户 100g和kg包装）
介绍：
胎球蛋白A Fetuin A是一种人类血浆糖蛋白，属于蛋白酶抑制剂 Cystatin 家族。胎球蛋白A在胚胎细胞和成年肝细胞中高表达，在单核细胞/巨噬细胞中低表达。该蛋白具有半胱氨酸蛋白酶抑制剂样结构域、磷酸钙结合位点和 TGF（转化生长因子）-β 细胞因子结合基序。重组人胎球蛋白A 是一种含有282个氨基酸的A链和27个氨基酸的B链的异二聚体蛋白。由于糖基化，重组胎球蛋白A 在非还原条件下通过 SDS-PAGE 迁移时的表观分子量为 45-55kDa。
胎球蛋白A由真核细胞表达的重组蛋白，是将蛋白基因接入稳定表达载体，转化CHO细胞，经克隆筛选，质量验证，挑选的稳定表达株，由化学成分确定的培养基（不含有任何动物源成分）发酵制备，工艺稳定，保证了产品质量及批次间的一致性。
生化/生理作用：
AHSG (α-2-HS-糖蛋白，也称为胎球蛋白-A)是主要的血清蛋白成分，可发挥多种钙依赖性生理活性，并可介导某些肿瘤细胞的生长信号。它还可以作为天然抗特定 TGF-β（转化生长因子 β）和 BMP(骨形态发生蛋白)信号蛋白的拮抗剂。血清中胎球蛋白 A 的高水平与轻度成骨不全有关。另外，在佩吉特氏病中观察到它的水平下降。它被预测为下咽鳞状细胞癌早期诊断的潜在生物标志物。
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