Calcein AM细胞增殖与毒性检测试剂盒操作规程
2023-11-16 来源:本站 点击次数:504
Calcein AM细胞增殖与毒性检测试剂盒操作规程
、在96孔板加入细胞00μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入00微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入00微升5000～0000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～0μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及00%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（完全培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×00
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 0%时的药物浓度(IC90)
、在96孔板加入细胞00μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入00微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入00微升5000～0000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0～0μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及00%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成× MTT 溶液。
5、每孔加50μL × MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液，每孔加50μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。
8、结果分析
a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（完全培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×00
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 0%时的药物浓度(IC90)
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