南京师范大学海洋科学与工程学院孟庆国课题组研究了MIRA 和 MIRA-LFD 螺原体检测方法的开发和应用。相关研究成果以“Development and application of the MIRA and MIRA-LFD detection methods of Spiroplasma eriocheiris”为题在国际学术期刊journal of invertebrate pathology在线发表，期刊影响因子为3.4。



研究背景：
中华绒螯蟹养殖已成为我国水产养殖的主导和支柱。由螺原体引起的颤抖病（TD）是中华绒螯蟹最具破坏性的疾病。因此，建立一种快速简便的检测方法，对疾病的预防、控制和及时治疗具有重要意义。本研究构建了一种能在室温下快速简便检测螺原体的核酸扩增方法-多酶恒温快速扩增法（MIRA）和能以视觉的形式迅速读出的方式MIRA检测结果的MIRA-LFD。

研究结果：
本研究根据螺原体的保守基因序列，构建并筛选了合适的扩增引物。设计并标记了相关的特异性探针和所选的特异性扩增引物。然后对 MIRA 和 MIRA-LFD 反应条件进行了优化。结果表明，MIRA 和 MIRA-FFD 分别能在 37℃的温度下用 30 分钟和 10 分钟鉴定出螺原体



为了研究 MIRA 和 MIRA-LFD 的特异性，选择了三种革兰氏阴性菌（枯草杆菌、苏云金芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌）、三种革兰氏阳性菌（大肠杆菌、嗜水气单胞菌和鼠伤寒沙门氏菌）和螺原体。结果表明，MIRA 和 MIRA-LFD 对 螺原体具有高度特异性，对其他六种病原体没有反应。
然后对比了 PCR、MIRA 和 MIRA-LFD 三种检测方法的灵敏度。结果表明，PCR 的检测限为 1 ng/L，而 MIRA 和 MIRA-LFD 的检测限为 10 pg/L
最后使用优化过的MIRA和MIRA-LFD 反应体系、反应引物、反应条件，针对随机提取的17个样本DNA以及阳性对照与阴性对照分别进行了中华绒螯蟹螺原体MIRA，MIRA-LFD和PCR检测. 通过分析比对不同检测方法的结果，判断本实验所建立的中华绒螯蟹螺原体MIRA和MIRA-LFD检测方法可行。



总之，本研究构建的MIRA 和 MIRA-LFD 可用于快速检测中华绒螯蟹螺原体，具有快速、灵敏和特异性强的优点，不需要任何专业设备即可检测到螺原体。这些检测方法对于中华绒螯蟹水产养殖中的颤抖病控制至关重要。在这种情况下，可以及时采取早期检测措施，避免病原体的传播，减少中华绒螯蟹颤抖病造成的损失，从而促进水产养殖业的健康发展。