人总胆固醇ELISA血清样本处理的核心是严格控时、防溶血、规范冻存，关键步骤和禁忌直接决定结果有效性。

采血前准备关键要求

采血前2周保持日常饮食习惯，避免急性病、外伤或手术等特殊状态。

严格‌空腹12小时‌采血，采血前24小时不饮酒、不做剧烈运动。

静坐15分钟后再采血，止血带使用时间绝对不超过1分钟，避免血液局部浓缩。

分离血清核心操作步骤

采血后室温直立静置30~60分钟，等待血液完全自然凝固。

以3000r/min离心10~20分钟，彻底分离血清与血细胞层。

轻柔吸取上层清亮淡黄色血清，全程避免触碰下层红细胞沉淀。

分离完成后30分钟内完成分装，不要长时间让血清和血细胞接触。

样本保存与复温要点

4℃环境下血清总胆固醇可稳定7天，短期存放不要超过5天。

长期检测按单次用量分装为50~100μL小份，-20℃可稳定保存3个月。

冻存样本取出后‌室温自然解冻‌，禁止37℃以上水浴快速加热。

完全解冻后轻缓颠倒混匀10~15秒，1小时内必须上样检测。

绝对不能碰的操作禁忌

中重度溶血样本直接弃用，红细胞释放的过氧化物酶会引发假阳性，结果完全失真。

绝对禁止向样本中加入叠氮钠，它会完全抑制HRP酶活性，直接造成假阴性。

冻融次数严格控制在≤2次，反复冻融会破坏脂蛋白结构，导致结果系统性偏低。

脂血浑浊样本必须先5000×g离心5分钟去沉淀，不可直接上样检测。