核算抽题仪简介
2012-04-27 来源:本站 点击次数:1042标志说明.................................................................................................................... 1
试剂内容物............................................................................................................... 2
A. 试剂.................................................................................................................. 2
B. 提取盘与磁棒套............................................................................................ 2
运输与储存............................................................................................................... 3
自备工具.................................................................................................................... 3
产品简介.................................................................................................................... 4
产品用途.................................................................................................................... 4
重要提示.................................................................................................................... 5
核酸提取程序........................................................................................................... 7
A. 标签贴纸......................................................................................................... 6
B. 操作程序......................................................................................................... 7
使用限制.................................................................................................................... 9
障碍排除.................................................................................................................. 10
附录.......................................................................................................................... 12
A. 样品制备....................................................................................................... 12
B. DNA纯度....................................................................................................... 12
符号说明
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制造日期[DK1] | |
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制造公司 | |
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生产批号 | |
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产品编号 | |
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一次性用品 |
试剂内容物
A. 试剂
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tacoTM Total DNA Extraction Kit
产品型号.: atc-dna
反应数目: 320 | ||
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试剂名称 |
体积 |
数量 |
|
Magnetic Beads1（磁珠） |
20 ml |
1 |
|
Lysis Buffer（裂解液） |
180ml |
1 |
|
Washing Buffer A（洗涤液A） |
270 ml/瓶 |
2 |
|
Washing Buffer B2（洗涤液B） |
40 ml/瓶 |
2 |
|
Eluting Buffer（洗脱液） |
55 ml/瓶 |
1 |
|
使用说明书 |
|
1 |
*所有试剂皆可能是刺激性物质
1所有试剂使用前请先确认无沉淀现象，磁珠最为需要注意
2Washing Buffer B 使用前请先添加230 ml 95%酒精
B. 萃取盘与磁棒套
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产品名称 |
数量(个) |
产品型号 |
|
96孔萃取盘 |
20 |
atcp |
|
磁棒套 |
40 | |
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标示贴纸 |
1 |
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*勿重复使用此一次性耗材
储存与运输
所有试剂在保存期限内，将盖子锁紧后均保存室温保存(23±4℃)即可 ，若未照说明书建议执行，恐会影响试剂的表现。
自备工具
在处理化学药品时，须穿带实验衣、手套与护目镜，以确保自身安全。
l tacoTM 核酸自动提取仪器
l 一次性胶皮手套
l 微量离心管
l 移液枪(量程为1000-100ul, 200-20ul各一或是多次分注移液枪)
l 移液枪吸嘴
l 95% 酒精
产品简介
tacoTM Total DNA Extraction Kit以磁性分离技术萃取核酸，利用包覆二氧化硅的磁珠与核酸结合，与核酸结合，经过裂解后，核酸会与包覆着二氧化硅的磁珠结合，随后以washing buffer去除掉多余的杂质，便可利用eluting buffer从磁珠中elute出核酸，加上多次washing buffer的清洗步骤便完成萃取。此萃取试剂可从使用者自行验证过均质的全血、白血球、动物组织及细胞中萃取出DNA，仅作研究使用。
注意：本试剂仅作研究使用，非任何动物或人类的治疗及诊断用。
产品用途
tacoTM 总DNA核酸提取试剂，是一个使用在核酸提仪器上的试剂，让核酸提取的速度变得更快速，并同时保有好的核酸品，适用的样品非常的广泛，像是虾类组织、血液、动液组织…等。
重要提示
l 收到试剂后请先查看试剂是否有破损现象，若有破损现象，请跟销售商或是原厂联系，破损的试剂请勿开封使用，以免影响您实验结果并确保您的退货权益。
l 添加不同试剂时 请确实更换移液枪吸嘴；
l 所以离心动作均设定在室温状态；
l 操作化学药剂请穿戴实验衣、一次性手套与护目镜；
l 若有实验污染疑虑时，请随时更换手套；
l 实验操作时，均使用同一批号之试剂；
l 实验操作时，请避免微生物之污染；
l 实验之标的物若有传染性的风险时，请在超净工作台内进行，以免危害到操作人员自身；
l 实验操作者，需经操作训练。
核酸提取程序
A. 标示贴纸
为操作方便与辨识，使用前请先将标示贴纸贴在96孔提取盘上（无缺角的长边），每罐瓶口上方也贴上简易的缩写贴纸，避免使用过程发生人为上的失误。
l 96孔提取盘：
将贴纸贴在96孔盘上（方向性缺角朝右上方，贴纸贴在离自己最近的下方位置）。
l 瓶口缩写贴纸：
将贴纸贴在瓶口上 。
瓶子缩写意义
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LB |
Lysis Buffer（裂解液） |
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M |
Magnetic Bead（磁珠） |
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WA |
Washing Buffer A（洗涤液A） |
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WAM |
Washing Buffer A + Magnetic Bead（洗涤液A 与 磁珠） |
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WB |
Washing Buffer B（洗涤液B） |
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E |
Eluting Buffer（洗脱液） |
B. 操作程序
1. 将试剂分别加到96孔提取盘里（具有方向性，斜切角应在右前方）；；
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步骤 |
试剂、试剂量与孔槽位置 |
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1 |
添加400μl Lysis Buffer到第1（或7）孔 |
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2 |
添加750μl Washing Buffer A到第2（或8）孔 |
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3 |
添加750μl Washing Buffer A到第3（或9）孔 |
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4 |
添加750μl Washing Buffer B1到第4（或10）孔 |
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5 |
添加750μl Washing Buffer B到第5（或11）孔 |
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6 |
添加50μl Eluting Buffer到第6（或12）孔 |
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7 |
添加50μl Magnetic Bead2到第2（或8）孔 |
1Washing Buffer B 使用前请先添加230 ml 95%酒精
2将磁珠罐倒置确定无沉淀状况，每次添加时均要摇匀
2. 将处理好的样品（请参照附录）添加到#1（与/或 #7）；
3. 将提取盘放到tacoTM核酸自动提取仪，确实将提取盘推到底与固定架位置切齐，提取盘斜切角位置在右前方；
4. 将磁棒套放到相对应的磁棒套架上，将磁棒套的勾子扳起，确认磁棒套外缘与架子外缘切齐（如下图）；
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Mortise |
|
Hook |
5. 按压“Door”，将电动门关下，按压“Start”，启动提取程序；
6. 提取程序结束后，将磁棒套取出丢弃，并将提取出的核酸吸取到新的微量离心管中备用；
使用限制
本试剂是经ISO 9001:2009标准方式生产，但不同样品上的验证与验效，目前仅针对全血做验证验效，若是用于其他研究单位不同类型的样品使用，则会需要再进行试验，确认效能。
常见问题与对策
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出现问题 |
解决方案建议 |
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低 DNA量回收 | |
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(a) 磁珠未充分混合均匀 |
a. 于操作添加试剂时，必须将磁珠放置于震荡器上震荡30秒（无沉淀现象），已确定磁珠是充分混合过；
b. 添加时，必须边摇动边添加，以确保每次加入的磁珠浓度是相同的； |
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(b) Washing Buffer B 未添加酒精 |
请确认Washing Buffer B混合过正确的酒精量； |
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(c) 试剂未加入正确位置 |
请确认是否依正常操作程序添加试剂； |
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(d) 磁棒套未装上 |
会导致磁珠无法放下，所有程序都无法正常进行： |
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(e) 原本样品保存状况差或样品量过少 |
样品保存状况不好或是加入过少的样品量，并不利于核酸抽题； |
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(f) 操作温度不正确 |
试剂需要在16-30℃下操作，效能会最好； |
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(g) 自动核酸提取仪非建议的机型 |
本试剂所使用的机器，应以tacoTM 核酸自动提取仪为最佳； |
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DNA在后续实验表现状况差 | |
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(a) DNA不适合做为后续实验 |
建议以分光亮度计先测量DNA的260nm读值，在进行后续的实验； |
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(b) 核酸总量不足或是核酸浓度过高 |
建议可以增加eluting buffer到100ul，可增加核酸总量或降低核酸单位体积浓度； |
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A260/A280 比值低 | |
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(a) 吸光值读值未扣除320吸光值 |
260与280吸光值应扣除320（磁珠之背景值才是正确的）。 |
附录
A. 样品制备
1. 全血或是白血球
i 添加200μl 全血或 150μl 的白血球到提取盘的#1 (与/或#7) 准备提取；
ii白血球制备，可将全血以3000rpm离心10分钟后，将全血分层，上层是透明的是血清，中层白色为白血球，下层则是红血球。
2. 动物组织
i将约30毫克的动物组织与500ul Lysis Buffer放到微量离心管中，将动物组织研磨破碎；
ii 13000g离心3分钟，将动物组织碎片沉淀；
iii 取出上清液加到提取盘的#1 (与/或#7) 准备提取；
B. DNA纯度测量
DNA与RNA纯度测量，通常是以分光亮度计的260与280等吸光值测，用比值来观测，磁珠系统也是相同，但吸光值须扣除320吸光值才是正确的比值 (A260-A320)/ (A280-A320)，DNA纯度通常可以在 1.6~2.0。
C2010 GeneReach Biotechnology Corporation. All rights reserved. For research use only. Not intended for any animal or human therapeutic or diagnostic use.
[DK1]这个四个标识都是耗材上用的，RUO试剂盒的标示都是以文字叙述，没有图标
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