ClonExpress ® Entry 一步法入门克隆技术
2015-04-23 来源:Vazyme生物 点击次数:6295入门克隆(EntryCloning)是分子生物学常规实验手段之一，特指将目标DNA无选择性的插入某个特定载体中，为后续测序鉴定、穿梭转移等实验创造便利条件。TA克隆是最常规的入门克隆技术，该技术以其简单、快速等优势广受科研工作者的青睐，已逐渐成为入门克隆的必选方案。然而， 由于无法直接克隆平末端产物、平末端产物加A克隆效率低/步骤繁琐、单碱基粘性末端连接效率低、T载体自连背景高、大片段克隆效率极低、连接反应受DNA纯度影响大、连接产物具有双向性等诸多限制因素决定，该技术的适用性仍然是困扰很多研究者的棘手问题之一。
为了彻底解决这些问题，Vazyme的科学家创新性的将ClonExpress ® 同源重组技术应用到了入门克隆实验中，成功的研发出了ClonExpress ® Entry One Step CloningKit。使用时，需在目标DNA扩增引物5’端添加15bp固定序列以实现扩增产物与试剂盒配套克隆载体末端的同源性。将目标DNA扩增产物和试剂盒配套载体混合后，仅需一步30 min反应即可直接进行转化，完成克隆。反应过程中，同源重组酶Exnase ® Entry会催化扩增产物和克隆载体的高效环化，效率可达100 cfu/ng Vector，克隆阳性率可达95%以上。此外，ClonExpress ® Entry反应体系兼容绝大多数PCR反应体系，即扩增产物可不进行任何处理直接进行重组反应。相对于TA克隆而言，ClonExpress ® Entry一步法入门克隆技术具有适用性更广、效率更高、克隆长度更长、流程更简单等诸多优势。简单的思维转变，带来的却是全新的体验！
品牌：
Vazyme
供应商：
润博科仪
规格：
25 rxn/50 rxn C114-01/02
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ClonExpress Entry One Step Cloning Kit ( C114-01/02) 一步入门快速克隆试剂盒 订购信息 产品名称 规格 货号 价格（元） ClonExpress Entry One Step Cloning Kit* 25 rxn/50 rxn C114-01/02 600/1,000 非连接依赖型的快速克隆技术 1 及时入门，可一步到位 2 兼容各种常规PCR体系，产物可不经纯化直接克隆 3 有效克隆50 bp-10 kbp DNA片段 4 最大程度保证克隆成功率 产品描述: ClonExpress技术是一种简单、快速并且高效的DNA定向克隆技术，可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。将载体进行线性化，并在插入片段PCR引物5’端引入线性化载体的末端序列，使得PCR产物5’和3’最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列（15bp～20 bp）。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在Exnase的催化下，仅需反应30 min即可进行转化，完成定向克隆，阳性率可达95%以上。 ClonExpress II是新一代的重组克隆试剂盒，包含增强的重组酶Exnase II。和上一代产品相比，Exnase II中添加了独特的重组增强因子。一方面，这种增强因子可以显著提高重组克隆效率，即便使用低效率感受态细胞（107cfu/μg）也可实现高效克隆（100 cfu/ng Vector）。另一方面，Exnase II还兼容常规酶切、PCR反应体系。载体的酶切或PCR产物和插入片段PCR产物可以不进行DNA纯化，直接用于重组克隆，极大的简化了实验步骤。 ClonExpress Entry One Step Cloning Kit能够高效克隆50 bp-10 kb片段。扩增1 kb、2kb、5 kb、7.5 kb、10 kb五个插入片段，纯化后克隆至CE Entry Vector，重组产物转化XL10化学感受态(#C503，Vazyme)。各片段克隆效率如下图所示：  图1为ClonExpress Entry One Step Cloning Kit广泛的体系兼容性，PCR产物可不经纯化直接进行克隆。使用Phanta、Phanta EVO、Phanta Max、Taq、TaqPlus、AceTaq、LAMP七种聚合酶扩增1 kb插入片段，扩增产物直接克隆至CE Entry Vector，重组产物转化XL10化学感受态(#C503，Vazyme)。各种产物克隆效率如下图所示：   图2为出众的克隆阳性率。因ClonExpress Entry重组反应体系中无连接酶存在，所以几乎不存在载体自连背景，克隆阳性率可超过95%。分别克隆1 kb、2 kb、5 kb、7.5kb、10 kb五个插入片段至CE Entry Vector，重组产物转化后各平板分别挑取50个克隆进行菌落PCR鉴定，不同长度插入片段克隆阳性率如下图所示：  图3为宽广的模板量兼容范围。ClonExpress Entry One Step CloningKit具有宽广的模板量兼容范围，最大程度上保证了克隆成功率。扩增1 kb插入片段，扩增产物纯化后取不同量克隆至CE Entry Vector，重组产物转化XL10化学感受态(#C503，Vazyme)。各种产物克隆效率如下图所示：  |