RACE技术在基因工程抗体中的应用

2020-10-28 来源:本站点击次数:3046

前言

20世纪80年代后期，随着分子生物学的迅速发展，使得人们可以通过基因工程技术对天然的分子进行人为的改造，这为抗体药物带来了新的突破点和希望。了解和阐明抗体分子的结构及功能，为人类疾病诊断及治疗提供了新的推动力。

基因工程抗体

为了解决传统的鼠源性单抗存在的弊端,对鼠源性单抗进行改进以及人源化单抗的研制成为单抗研究的主要方向，随着分子生物学和细胞生物学的快速发展, 产生了第三代抗体制备技术，即基因工程抗体。主要包含嵌合抗体、改型抗体、完全人源化抗体、单链抗体、双特异性抗体，常于用检测和治疗等方面。而RACE技术让基因工程抗体的制备工作更加简化便捷。

RACE技术

01

RACE技术定义
RACE技术即cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends），基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法。通常用于已知中间片段序列，对未知两端序列进行扩增的一项技术。

02

RACE和普通PCR在重组抗体中的应用比较

普通PCR和RACE应用比较

普通PCR在抗体基因扩增中的应用

RACE法在抗体基因扩增中的应用

普通PCR法在重组抗体中的应用劣势	RACE技术在重组抗体中的应用优势
需要很多引物扩增测试	RACE技术特别适合 IG famliy 很多的物种，例如小鼠、人等
N端序列无法精准	可以获得完整的抗体可变区序列，信号肽序列以及5' UTR区域
目前主要基于已知序列设计引物，无法完全覆盖	RACE技术体系建立后，可以应用于其它物种以及未知序列物种

制备基因工程抗体时需要进行鼠杂交瘤扩增，通常利用5’RACE技术。5’RACE技术的优化将极大的提高基因工程抗体制备的成功率。华安生物进行5’RACE时，常使用加尾法，根据接头引物和自己设计特异引物，设计巢式PCR来进行二次扩增。

5’RACE技术原理

RACE扩增鼠杂交瘤-引物设计

1.正向引物：加接头序列即：

2.反向引物：选择 mouse IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3 相似性较高的CH1区域或其它保守区域设计下游引物。

Tips:

在逆转录、TdT加尾、PCR扩增这三个连续的酶促反应过程中，任何一步的失败都会导致前功尽弃。

目前华安生物也采用RACE技术开发生产一系列重组兔单克隆抗体，感兴趣的同学可以来看看哦~

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