常用菌种的液体石蜡保存法
2021-06-17 来源:本站 点击次数:2476
菌种,多是指国家的几个菌种保藏中心的成品菌种,在液氮状态下,盛放在安瓿管中。企业生产按国家要求,必须要国家的菌保中心购买菌种,不得采用外来菌种。
1、菌种保存原理
根据微生物的菌种生理、生化特性,在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度,使细胞基本处于休眠状态,生长繁殖受到抑制但又不至于死亡,以减低菌种的变异率。低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都有抑制微生物的代谢作用。
低温、干燥、真空是用于菌种保藏的重要手段。选择保藏方法时,首先应考虑方法能否长期地保持菌种原有的特性,同时也应兼顾到方法的经济和简便。在实际工作中,往往多种条件同时使用,以提高保藏效果。
2、菌种保存步骤
①、挑选特征典型的纯菌菌落;
②、确定保藏的合适菌体形态;
③、选择适宜的保藏方法;
④、定期对保藏菌种进行检查,观察是否发生变化,若有变化,须改变保藏方法,保藏期满应及时进行移种;
3. 液体石蜡保存法
本法是用石蜡将培养物与空气隔绝,以降低菌种的生理生化水平,并可防止水分蒸发,从而延长菌种的保藏期。
将菌种接种于斜面或穿刺于0.3~0.5 %琼脂半固体高层培养基中,培养好备用。取化学纯的液体石蜡装在试管中,每管10~15mL,加棉塞,瓶口包上纸,121℃高压灭菌30min,取出置37℃温箱或110~ 170℃烤箱中1 ~ 2h或干燥器内除去液体石蜡中的水分。
将上述液体石蜡加入培养好的菌种试管内,液体石蜡液面以高出培养基上端1㎝为宜,将试管直立,放入4℃冰箱中保藏。
(2)适用范围:适用于保藏部分霉菌,酵母菌和放线菌,对细菌保藏效果较差。
(3)特点:本方法简便易行,是实验室常用的一种保藏方法,该法主要使菌种与空气隔绝。
(4)注意事项:
①保藏时,用新鲜培养物接种,应检查纯度和特征后,方可进行保藏;
②保藏过程中,需经常观察斜面是否干燥,如干燥,需重新移种;
③使用菌种时,先将菌种管倾斜使液体石蜡流至一边,再用接种针挑取培养物接种到新鲜斜面上培养,待长出新培养物后,再移种一次到新斜面上即可使用;
④将沾有少量液体石蜡的接种针浸于95%酒精中片刻,再烧灼灭菌,以免直接在酒精灯下烧灼时,液体石蜡四溅,引起污染;
⑤液体石蜡在菌种管中高出培养基的高度要严格控制,如太多,会影响菌种交换气体,使保藏效果不好;如太少,斜面容易干燥,将缩短保藏期。一般以高出斜面1cm为宜;
⑥制备无菌液体石蜡时,每管装量不能太多,否则分装到菌种培养基中易造成污染。