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离心机的种类、原理、操作步骤、选型及生物安全离心机的特性

2022-12-23     来源:本站     点击次数:7382

一、离心机种类
根据进样方式分为连续离心机非连续流离心机(分批离心机)
连续 ( 流 ) 离心机:进样是连续进行的
非连续离心机(分批离心机):装一次样品后离心处理一次。目前Eppendorf 所有台式离心机均为非连续离心机。

根据是否带制冷功能分为常温型离心机、冷冻型离心机升温型离心机
常温离心机:占地面积小,离心期间样品温度会因摩擦生热而上升。
Eppendorf离心机在离心结束后会自动打开离心机盖(功能可关闭),防止样品过热。
冷冻离心机:后面或侧面装有压缩机以进行主动冷却,占地面积比非冷冻型大,在离心结束后不会自动打开离心机盖,根据不同的压缩机性能,可以在不同时间内将离心机冷却至所需温度。也可在长时间高速离心后仍保持设定温度。 Eppendorf 离心机专利的动态压缩机控制技术,优化制冷性能,保证温控的精度和准度,实现最佳冷却效果,延长压缩机使用寿命并降低能耗。在高温运行时依旧能保持设定温度。大部分 Eppendorf 冷冻离心机型号提供“快速冷却”功能(FastTemp 程序),不仅可以节省时间,也保证了离心质量, FastTemp pro® 功能更可以在预先设置的日期和时间自动预冷,提前完成温度准备工作。
升温型离心机: 部分特殊型号的离心机有加热功能,可以主动给样品加热,保证样品活性和质量。(Eppendorf 5702 RH 离心机具有加热功能)

不同的样品分离时所需离心力不同,因此根据相对离心力大小可以将离心机分为低速离心机、高速离心机超速离心机
低速离心机:通常用于细胞或者血液离心,最高离心力在几百到几千不等
高速离心机:能达到的离心力在 10,000 ~30,000 × g 。分子生物学实验最常用的离心力范围是 14,000 - 20,000 × g,病毒和细胞器的离心分离等应用需要 30,000 × g 的离心力。高速离心对离心管品质有较高要求。蛋白、核糖体、细菌溶解产物、病毒等物质的离心分离以及质谱用样品的制备,建议使用可耐受高离心力的离心管,如 Eppendorf 1.5 mL Safe-Lock 微量离心管(耐受离心力可达30,000 × g )
超速离心机:离心力达到 30,000 × g 以上。通常需要配备特殊的转子或者离心管来实现高速和高离心力(Eppendorf 超速离心机请查看官网www.eppendorf.cn
 

根据离心机的大小,可放在工作台上的称为台式离心机,可放在地面上的称为落地式离心机
落地式离心机:至少需要 1 平米的占地面积,可以节约实验台面空间,主要用于高速或大容量离心
台式离心机: 台式离心机有多种规格尺寸。根据尺寸分为以下2 类:
多功能离心机:离心腔体大、转子种类多。并提供多种规格和类型的适配器可供选择。最大可耐受离心力主要取决于离心耗材的性能
小型离心机:适用于微量离心管,占地面积小, 离心力为14,000 - 30,000 × g,最多可以离心 48 个 1.5/2.0 mL 微量离心管。部分型号还可以离心 15/50 mL 离心管或者 SBS 标准规
格的工作板。 一般均提供冷冻和常温两种版本。

二、离心原理
1.1
离心原理
在离心力作用下,混合物质由于密度差异而沉积分离。离心时间由物质的密度和施加的离心力决定:
> 密度越大,越快沉降到达管底 ( 密度 = 质量 / 体积 )
> 离心力越大,离心分离时间越短

离心分离按照应用可分为离心沉降和离心过滤两种
离心沉降
利用悬浮液(或乳浊液)密度不同的各组分在离心力场中迅速沉降分层的原理,实现液 - 固或液 - 液 ( 相 ) 分离。日常实验应用有沉淀离心、密度梯度离心、等密度梯度离心等。
沉淀离心
是离心机最常见的应用,即通过离心使固体集聚沉淀在离心管底部从而与液体 ( 上清液 ) 分开。在相分离的过程中,溶质从分散状态或者溶液介质中转移到另外一种溶剂中 ( 来进行化学 / 分子生物学分析 )。
等密度梯度离心
是指在离心力场下,在密度梯度介质中,颗粒移动到与它们各自的密度恰好相等的位置,形成一系列密度区,从而使不同密度的物质得到分离。
离心过滤
使悬浮液在离心力场下产生的离心压力,作用在过滤介质上,使液体通过过滤介质成为滤液,而固体颗粒被截留在过滤介质表面,从而实现液 - 固分离。例如超滤膜离心分离纯化大分子物。

 
三、离心机操作步骤
1、阅读操作手册
操作离心机前,请先阅读随机附送的离心机操作手册。
2、选择合适的转子和适配器
将转子安装到转子轴上,并使用包装中的转子扳手旋紧。
对于固定角转,检查离心管和转子孔是否匹配(有可能需要适配器)。对于水平转子,确定相同重量级别的吊篮安放到对称位置(同时检查重量级别数字和平衡性)。
正确安放吊篮
确保所有吊篮均正确地安放到转子上并且运行顺畅,没有安装上全部吊篮时严禁离心!确保离心耗材、转子、吊篮和适配器匹配,气密性吊篮还需检查离心耗材的高度是否匹配气密性吊篮盖。
禁止超过转子最大载重
使用前请仔细检查每个转子允许的最大载重量,注意所用离心管的最大离心耐受性。
3、设置离心参数
> 离心时间(最长可设置为连续运行)
> 相对离心力(rcf) / 转速(rpm)
> 离心温度(包括冷冻离心机的“FastTemp”预冷功能)
> 加减速档(防止样品重悬)
> 定速计时功能:达到预设转速时才开始计时
4、对称装载和配平样品
必须配平对称装载的样品即中心对称方式装载样品。
5、开始离心
旋紧转子盖,合上离心机盖,按下“Start”键开始离心。
6、离心结束
及时取走离心样品并切换到待机状态。如果离心机具有制冷功能,休眠时请关闭离心机盖以保证离心机腔室处于冷却降温状态;长时间不使用时建议关闭离心机,打开离心机盖,以降低离心机盖铰链和弹簧的负荷,并擦干腔体、转子和配件。 Eppendorf 微量冷冻离心机有冷凝水排放孔以避免冷凝水的积累,降低对机器的腐蚀。
7、转子的存放
不使用时及时移除适配器和吊篮,清洁干燥转子,转子、吊篮、吊篮盖垂直倒置存放在干净干燥的环境中。

四、如何选择合适的离心机
离心前请确保与参考实验方案使用相同类型的转子、相同的相对离心力、离心温度以及离心时间。总的来说,要想成功离心,主要参考以下参数:
> 样品类型
> 离心耗材
> 离心机种类
> 转子类型
> 适配器类型
> 相对离心力
> 离心所需温度
 
样品类型
生物及医学研究领域,离心样品主要有以下限制:
> 在最高转速和最大样本载量下,可离心物质的最大物质密度是
> 禁止使用离心机离心易燃易爆物质
> 禁止离心可能产生爆炸性气体的物质
> 禁止在处理爆炸物的工作间操作离心机
> 离心有机化学溶剂时,建议查看离心机和配件的耐化学腐蚀性

危险性样品
当处理危险性样品或者非Ⅱ级危险病原微生物(详情见世界卫生组织“实验室生物安全手册”)时,请严格遵守国家规定和实验室相关规定。我们强烈推荐使用认证的气密性转子和吊篮来避免污染。 Eppendorf 所有的气密性转子和吊篮盖的气密性均是经由位于英国 Porton Down 的独立的第三方检验机构 HealthProtection Agency ( 简称 HPA) 进行测试并认证的,符合 IEC1010-2-020 annex AA 标准。
 

危险性样品包括生物危险性样品、放射性样品和危险化学品等高危物质。生物危险性样品有许多种,包括病毒、细菌以及含有人类体液的样品如血液等。

五、生物安全离心机的特性
气溶胶(aerosol)是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,又称气体分散体系。其分散相为固体或液体小质点,大小为 0.001 ~ 0.1 微米,分散介质为气体。气溶胶污染越来越受到各实验室重视。在很多操作比如向离心管中加样、打开离心管
盖子、离心后移取上清液等均会释放气溶胶扩散到实验室环境中。

在选择生物安全离心机时,需注意以下几点性能:
> 转子必须可以在 121 ° C, 20 分钟高温高压下灭菌,确保可以有效地去除污染物。如果样品中含有只能在更高温度才能去除的朊病毒,务必使用可以在 142 ° C, 120 分钟高温高压灭菌的转子
> 使用经过认证的气密性转子和附件,可以防止在离心管意外破裂的情况下气溶胶泄漏到环境中。由国际权威机构测试和出具的证书
 
Eppendorf QuickLock® 快速锁定转子盖
Eppendorf 气密性 QuickLock 转子盖旋转 1/4 圈即可快速锁定和打开转子盖,节约时间,使用方便,减少手腕重复性劳损。

专为开盖离心而设计的 Kit 转子
使用 Spin-column 离心柱在离心时往往会出现离心管盖打断的情况,造成在管盖上的标记丢失无法追踪。 Eppendorf 专门设计的 Kit 气密性转子加宽边缘不仅可以保证离心柱开盖离心时不受转子尺寸影响而断裂,避免了重新转移到新的离心管存放,节省了时间,避免浪费。同时其气密性也保证了离心的安全。

可单手操作的气密性快速锁定吊篮盖
> 只需一只手即可快速打开或合上,样品取放更便捷
> 可以在生物安全柜中打开,使用更安全方便
> 气密性经由位于英国 Porton Down 的独立第三方检验机构Health Protection Agency 进行测试和认证
 

普通转子容易打断离心管盖
 

Eppendorf Kit 转子加宽的边缘,放心盖上管盖
 
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