甲基丙烯酰化明胶（GelMA）由于具有生物兼容性好、可见光固化的特点，已广泛应用于细胞3D培养、组织工程、生物3D打印等研究领域。EFL团队研制的GelMA产品具有批次稳定、服务专业等优点，深受国内外科研工作者的好评与认可。为了帮助用户更好的使用EFL-GM系列水凝胶产品，EFL团队现整理GelMA使用相关的高频问题如下，可供参考。
  Q1：1g GelMA材料可以配多少溶液？

答：EFL推荐使用的工作液浓度范围为5%-30%（w/v），1g可以配3.3-20mL工作溶液；用户常用浓度范围为5%-10%（w/v），1g可以配10-20mL工作溶液；附赠LAP送引发剂，无需再单独购买。
 
Q2：GelMA的取代度有哪些型号？在GelMA表面接种细胞和把细胞混到GelMA里做三维培养，分别应该选什么型号的GelMA？要是做3D打印，又应该选什么型号呢？

答：
①EFL目前有氨基取代度为30%、60%和90%三种常用固定型号的GelMA，均有现货。GM30、GM60和GM90均可应用于细胞培养，同等条件下，取代度越高，固化后的水凝胶强度越强；每种细胞的最适取代度和最适强度均有所不同，建议您先用三个型号的水凝胶分别做一下预实验，筛选最适合的型号、浓度及固化条件。

②在所有型号GelMA的表面接种细胞效果都很好；对于细胞混GelMA里做三维培养的型号选择上，EFL常用型号及使用参数推荐如下：5%GM30（w/v），EFL-LS-1601便携式固化光源光照30-60s，5%GM60（w/v），EFL-LS-1601便携式固化光源光照15-22s。

③GM30、GM60和GM90均可应用于挤出式打印，均可复合其他材料一起做复合水凝胶挤出打印，可按需要打印的支架强度进行取代度的选择，如需载细胞挤出打印需同时考虑细胞生长情况进行选择。如做投影式光固化高精度打印，则优选GM90，成形效果和载细胞性能均非常好。PS:用户如有高强度、精加工双光子打印成形、低温敏性等额外的GelMA材料性能需求，可单独咨询EFL技术人员，提供更优解决方案。
 
Q3：GelMA怎么保存？我放在-4℃冰箱里，发现溶液固化了，是不是变性了呀？

答： 干态套装：室温，3个月；4℃，12个月；-20℃，18个月。无菌溶液：4°C避光，7天；-20℃避光，6个月。低取代度的GelMA溶液建议现配现用，多次反复冻溶无法保证固化品质。GelMA溶液具有温敏性，低温形成可逆的物理凝胶，室温或冰箱冷藏避光保存时凝胶化属于正常现象，加热即可恢复溶液状态。
 
Q4：GelMA溶解后是有点稠的液体，能过滤么？过滤损耗大吗？高浓度过滤会不会很费劲啊？有没有其他的灭菌方式啊？能121℃高温高压灭菌吗？

答：可以过滤，可用0.22微米无菌过滤头过滤除菌。过滤损耗与浓度成正比，同一型号GelMA溶液过滤，浓度越高损耗越多。常用的5% (w/v)浓度过滤损耗率＜5%，10% (w/v)浓度过滤损耗率＜10%。使用浓度≤10%（w/v）时，优先选0.22um过滤除菌方式最实用；浓度＞10% (w/v)时，高浓度液体较粘稠不易过滤，损耗大，可选择巴氏灭菌，或直接选购15%（w/v）的无菌GelMA溶液成品（货号：EFL-S-GM-30/60/90）。GelMA属于聚多肽类材料，不可以121℃高温高压灭菌，容易破坏分子结构，导致无法固化。
 
Q5：哪种型号的GelMA适合用于动物实验？

答：各型号都可应用于动物实验，具体选用的型号和浓度要根据实验需求来选择。需要材料缓慢降解则选用高浓度高取代度，对应杨氏模量较高的GelMA型号，反之相反；如果是载细胞实验要同时考虑所需细胞效果的条件。GelMA水凝胶已被广泛应用于各类组织修复与再生（骨修复、软骨修复、神经再生、心肌修复等）、创面敷料、各类药物与生长因子的负载与控释等生物医药研究领域。可通过调节水凝胶的浓度和固化条件来模拟不同生物组织的机械强度，EFL常用型号GelMA的杨氏模量范围参考值如下表所示。  
Q6：用GelMA负载外泌体或者ECM做细胞培养可以吗？能固化吗？有推荐的型号吗？

答：可以的。EFL有很多客户做相关研究，调整好添加物与GelMA的比例固化即可，具体型号要看您对强度的需求以及细胞的特性。GM30、GM60和GM90均有客户使用，您可以先做预实验找出适合自己细胞的条件。
 
Q7：将GelMA铺在载玻片或者培养皿上，固化以后明胶就会粘在基底上，有什么方法可以避免明胶粘在基底，或者尽量减少粘附力？

答：可以使用EFL的防粘膜（货号：EFL-GRF系列），防粘膜适用于各类常用水凝胶和树脂的无损剥离。如果您是做细胞三维培养可尝试EFL的三维培养定制的固化环套装(货号：EFL-SCR-3D系列)，可改善细胞在胶内的物质代谢，且便于后期表征操作。
 
Q8：请问怎么从GeMA中提取细胞做WB和PCR呢？师兄说用胰酶没用，分不下来。

答：您可使用EFL的GeMA裂解液(货号：EFL-GM-LS-001）来降解GelMA提取细胞。GeMA裂解液可在0.5-2h内快速降解GelMA并能较好的保持细胞的完整性和活性。提取出的细胞可以继续传代培养，也可直接进行蛋白或RNA提取。
 
Q9：为什么我3D打印的GelMA网格载细胞支架有一面细胞长的好，有一面长的差呢？不是应该整个支架都长的差不多吗？

答：EFLers实践经验表明，支架放在板孔中培养，贴板底侧没有上表面长的好，支架在培养基中悬浮培养，则整个支架细胞生长无明显差异。您可将打印好的载细胞支架置于EFL自主研发的固化环3D细胞培养辅具（货号：EFL-SCR-3D系列）上培养，可使支架整个悬浮在培养基中，增强支架内细胞的物质代谢，改善您所遇到的问题。
 
Q10：为什么我同一次实验做出来的胶块里面，有的胶块细胞长的好，有的胶块细胞长的不好啊？

答：您好！这可能与您的固化操作有关。您在固化过程中，需保持固化条件一致，光强、光照距离和光照时间相同。推荐您使用EFL自主研发的便携式固化光源（货号：EFL-LS-1601-405），该光源对比传统的手电筒光源，具有光强稳定，光照距离固定，光照时间可控等优点，可以很好的消除样本间制作的差异性。
   
Q12：您好，我想在打印好的支架表面包裹一层负载细胞的GelMA水凝胶，然后做免疫荧光染色，怎么才能拍出来细胞在支架上的分布呢？我的支架没有荧光，拍不出来结构。

答：可以选择直接用荧光GelMA（货号：EFL-GM-RF/GF/BF系列）包裹培养细胞，或者用烯类偶联荧光染料（货号：EFL-DYE-UF-ENE系列）给普通GelMA标记上荧光，一起包裹培养细胞。选择和您做免疫荧光颜色不冲突的荧光即可，利用GelMA发出的荧光勾勒出您打印的支架结构即可。